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tianyahuimou金蟲 (正式寫手)
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[求助]
島津HPLC出現(xiàn)倒峰是什么原因
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如題，最近用島津HPLC做手性拆分，用的是紫外檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)一個(gè)正峰之后，出現(xiàn)一個(gè)倒峰，然后又出現(xiàn)一個(gè)正峰。開始我以為是柱子的問題。但是后來我又換了一根柱子。結(jié)果也是跟第一個(gè)柱子一樣。 兩根柱子是鍵合的大賽璐的IC、ID柱子，對(duì)溶劑的耐受性很好，柱子的壓力也穩(wěn)定。 網(wǎng)上看了下類似問題，以為是溶劑問題。我的流動(dòng)相是石油醚和異丙醇，而樣品是用二氯甲烷溶解的。但是DCM和流動(dòng)相是互溶的，應(yīng)該不存在溶劑對(duì)峰型的影響，因?yàn)橐郧耙策@樣做過，拆分沒出現(xiàn)過問題。 是什么原因？急…… 希望各位HPLC高手能指點(diǎn)一二。 |
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同意3樓。 倒峰產(chǎn)生，很多時(shí)候是流動(dòng)相或溶劑中某些雜質(zhì)紫外吸收低于分析波長(zhǎng)所致，和柱子關(guān)系不大。關(guān)鍵還是得流動(dòng)相及溶劑處找原因。當(dāng)然，不排除檢測(cè)器性能原因。 首先，使用了石油醚，倒不如使用色譜純的正己烷；其次，溶劑和流動(dòng)相互溶與溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生無直接關(guān)系，不能主觀臆斷說“應(yīng)該不存在影響”，即使使用流動(dòng)相作溶劑，也不能完全保證不發(fā)生溶劑效應(yīng)。 |
4樓2012-06-18 10:34:47
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出現(xiàn)倒峰的原因： 1.常為溶劑峰,流動(dòng)相的紫外吸收大于樣品的溶劑的紫外吸收,就產(chǎn)生倒峰. 2.樣品中的雜質(zhì)沒有紫處吸收或吸收很小,而流動(dòng)相紫外吸收大,如用甲醇時(shí)波長(zhǎng)設(shè)定在220nm以下時(shí),常出現(xiàn)這種現(xiàn)象. 3.進(jìn)樣過程中進(jìn)入了空氣也會(huì)導(dǎo)致的. 4.如果流動(dòng)相有紫外吸收的雜質(zhì)，使用紫外檢測(cè)器時(shí)，會(huì)產(chǎn)生倒峰，必須用高純度的溶劑作為流動(dòng)相。 5.檢測(cè)器的極性接反了，也會(huì)出現(xiàn)倒峰。 第一，用的是什么檢測(cè)器？如果是示差折光，那很正常； 第二，倒峰在什么位置？如果是溶劑峰，也很正常，要去除的話，溶劑改用流動(dòng)相； 第三，如果是紫外檢測(cè)器（MWD,OR DAD）,有沒有加參比波長(zhǎng)？如果有，去掉參比波長(zhǎng)或另選合適的參比波長(zhǎng)； 第四，如果是紫外檢測(cè)器，流量池里是否有氣泡產(chǎn)生？1.抽濾或超聲去除流動(dòng)相里的氣泡；2.檢查在線脫氣機(jī)（如果有的話）；3.調(diào)節(jié)背壓； 第五，流動(dòng)相是否在該波長(zhǎng)（用紫外檢測(cè)器的話）有較大的背景？1.檢查你用的溶劑的等級(jí)；2.檢查色譜條件的合理性。 我認(rèn)為是參比波長(zhǎng)設(shè)置的問題，試著換個(gè)參比波長(zhǎng)看看 多半是因?yàn)闃悠返模校戎蹬c流動(dòng)相的ＰＨ值不一致造成的，解決辦法：加大鹽的濃度，用流動(dòng)相溶解樣品即可． 流動(dòng)相背景吸收波長(zhǎng)低于檢測(cè)波長(zhǎng) 1. 組分的吸收小于流動(dòng)相的背景吸收，可能原因是流動(dòng)相中加入截止波長(zhǎng)較大的成分或波長(zhǎng)選擇不合適 2.二極管陣列檢測(cè)器中參比波長(zhǎng)處吸收大于組分吸收； １、 首先確定是還是柱還是檢測(cè)器的問題：換下柱看是否仍存在倒峰，如果不行再換檢測(cè)器，以確定是否檢測(cè)器或者柱的問題�；蛘呤裁炊疾灰獡Q單純換個(gè)其他化學(xué)成分，看是否是因?yàn)槟愕臉悠反嬖趩栴}。 2、如果都做了，還是不行，就考慮是否流動(dòng)相問題，一般DAD存在有規(guī)律倒峰的現(xiàn)象還真的不是很好解釋，看您意思好象是倒峰只是跟著你的主成分走，這樣你可以首先進(jìn)個(gè)空白溶劑樣品，看是否還有倒峰存在，如果空白樣品沒有倒峰那么就是你樣品問題，是否你樣品處理的有問題， 一般液相對(duì)流動(dòng)相的PH控制在大概2.5-7.5范圍，如果過酸或過堿會(huì)導(dǎo)致填料被破壞引起成分在柱上的洗拖保留發(fā)生變化而導(dǎo)致規(guī)律倒峰出現(xiàn)也有可能，測(cè)下您的流動(dòng)相PH以保證這個(gè)沒問題。樣品中殘留的一點(diǎn)酸或堿應(yīng)該沒問題，因?yàn)樗釅A在柱上基本沒有保留，且量小應(yīng)該沒影響 倒峰的出現(xiàn)，我個(gè)人認(rèn)為是色譜柱的殘余硅羥基所致，同一個(gè)色譜條件，我曾經(jīng)分別用非端基封尾柱和端基封尾柱考察，前者即便是進(jìn)流動(dòng)相也會(huì)出現(xiàn)負(fù)峰，后者則沒有，推斷應(yīng)為殘余硅羥基對(duì)進(jìn)樣樣品中的部分離子造成吸附，使進(jìn)樣部分的液體與流動(dòng)相產(chǎn)生差異，由于溶質(zhì)離子經(jīng)過檢測(cè)器時(shí)，紫外吸收信號(hào)減小，所以形成負(fù)方向的色譜峰。 1.樣品引入 2.樣品與流動(dòng)相反應(yīng)所致 3.檢測(cè)條件不合適,建議換二極管陣列查找 4.外部引入的污染 最后一點(diǎn)幾率很小,但也會(huì)存在的,就是儀器設(shè)備的系統(tǒng)誤差 |
6樓2012-06-18 16:27:19
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