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[求助]
ELISA同一樣品，稀釋倍數(shù)越高，得到結(jié)果越大？為嘛？
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ELISA檢測(cè)血清樣品中蛋白含量。常規(guī)過(guò)程。 同一樣品不同稀釋倍數(shù)得到結(jié)果差別較大，并且是隨著稀釋倍數(shù)越大越大，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出的結(jié)果就越大，這是什么個(gè)情況？ PS：之前也有碰到過(guò)，以為是稀釋時(shí)混合不夠均勻的問(wèn)題，后一段時(shí)間沒(méi)做，這次的結(jié)果又出現(xiàn)在這個(gè)問(wèn)題。之前做倍比稀釋?zhuān)@次是3倍稀釋。 Sample ID Loc Dilution Blank Data Calc Conc SMP02 A4 20 0.386 3378.65 B4 60 0.32 7141.63 C4 180 0.194 10934.7 D4 540 0.108 17991.7 [Ave] 0.252 9861.67 百思不得其解啊。。誰(shuí)能給些意見(jiàn)建議，先在此謝過(guò)啦~  |
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liushan09: 回帖置頂 2012-06-23 16:24:29
liushan09: 回帖置頂 2012-06-23 16:24:29
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抗原抗體結(jié)合存在有最佳比例關(guān)系。 如果抗原（或抗體）初始濃度太高，抗原與抗體之間的濃度差別過(guò)大，就會(huì)出現(xiàn)如此現(xiàn)象。隨著進(jìn)一步的稀釋?zhuān)銜?huì)出現(xiàn)關(guān)系曲線(xiàn)。當(dāng)濃度低于一定范圍，反應(yīng)關(guān)系消失。 所以，Elisa檢測(cè)的線(xiàn)性關(guān)系，僅適用于一定的濃度范圍。 |
2樓2012-06-21 11:36:58
merryhan
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7樓2012-06-22 20:29:16
merryhan
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3樓2012-06-21 15:38:43
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ELISA體系是之前實(shí)驗(yàn)人員建立的，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)采用軟件進(jìn)行四參數(shù)擬合，舉例如圖。 又想了想出現(xiàn)上述情況可能的原因： 1、樣品稀釋 2、從低濃度到高濃度加樣，不換槍頭 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的形狀。落在高吸光值區(qū)間，稍一點(diǎn)偏差對(duì)結(jié)果影響就很大。因此在稀釋倍數(shù)準(zhǔn)確的情況下，落在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)變化急劇區(qū)域數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確。即吸光值小的部分結(jié)果準(zhǔn)確。 1、2現(xiàn)在基本可以排除。這兩次進(jìn)行了自認(rèn)為非常充分的稀釋過(guò)程。之前加樣也是低濃度到高濃度不換槍頭。所以，3的可能性比較大。 |
4樓2012-06-21 23:30:10
5樓2012-06-21 23:37:04
6樓2012-06-21 23:40:01
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初涉這個(gè)領(lǐng)域，很多東西都不太了解。還請(qǐng)多多賜教。先在此謝過(guò)~ 1、關(guān)于理論血藥濃度與我的稀釋倍數(shù)： 實(shí)驗(yàn)采用ICR小鼠，給藥劑量為5mg蛋白/kg體重，藥液體積為100ul/20g體重，皮內(nèi)注射。于注射后0.5h、1h、2h、4h、6h、24h等取血。不知該如何計(jì)算理論血藥濃度，是根據(jù)小鼠全血量和皮內(nèi)注射這種給藥方式的生物利用度嗎？ 我的稀釋倍數(shù)是參考之前做其他蛋白皮內(nèi)給藥時(shí)的經(jīng)驗(yàn)稀釋倍數(shù)。但第一次做的時(shí)候，稀釋倍數(shù)過(guò)大（從100X、200X開(kāi)始做倍比），做8個(gè)倍比稀釋只有1~2個(gè)倍數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍內(nèi)甚至?xí)刻荻瘸蕖Ｒ虼撕罄m(xù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整了稀釋倍數(shù)，從20X開(kāi)始做倍比。 2、抗藥性抗體： 小鼠都只給過(guò)一次藥物。在48h采血時(shí)，已經(jīng)能產(chǎn)生抗體了嗎？ 為什么產(chǎn)生抗藥性抗體后，ELISA檢測(cè)時(shí)，稀釋倍數(shù)大，值就越高呢？ 我該如何檢測(cè)是不是產(chǎn)生了抗藥性抗體呢？ 3、HOOK效應(yīng)： 先百度學(xué)習(xí)了下此效應(yīng)。。此效應(yīng)是說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的濃度梯度設(shè)計(jì)不合理嗎？標(biāo)準(zhǔn)品的濃度偏高了？ 這個(gè)ELISA方法是從別人手中接過(guò)來(lái)直接重復(fù)的，只知操作，思考不足。。 |
8樓2012-06-24 14:01:25
9樓2012-06-24 14:29:30
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1、標(biāo)準(zhǔn)品濃度稍做調(diào)整之后標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)附圖，之前從500ng/ml開(kāi)始，現(xiàn)在的是從300ng/ml開(kāi)始。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)只是出現(xiàn)了S曲線(xiàn)的上半段，是不是意味著可以在將標(biāo)準(zhǔn)品濃度降低，盡量延長(zhǎng)其線(xiàn)性區(qū)間？（現(xiàn)在的直線(xiàn)范圍可視為0.03-0.1，或者0.03-0.13.） 2、樣品的結(jié)果，見(jiàn)附圖 選擇OD值落在0.03-0.13之間的數(shù)據(jù)。這樣結(jié)果可信么？ |
10樓2012-06-24 15:00:50
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