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[求助]
ELISA同一樣品，稀釋倍數(shù)越高，得到結(jié)果越大？為嘛？
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ELISA檢測血清樣品中蛋白含量。常規(guī)過程。 同一樣品不同稀釋倍數(shù)得到結(jié)果差別較大，并且是隨著稀釋倍數(shù)越大越大，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的結(jié)果就越大，這是什么個情況？ PS：之前也有碰到過，以為是稀釋時混合不夠均勻的問題，后一段時間沒做，這次的結(jié)果又出現(xiàn)在這個問題。之前做倍比稀釋，這次是3倍稀釋。 Sample ID Loc Dilution Blank Data Calc Conc SMP02 A4 20 0.386 3378.65 B4 60 0.32 7141.63 C4 180 0.194 10934.7 D4 540 0.108 17991.7 [Ave] 0.252 9861.67 百思不得其解啊。。誰能給些意見建議，先在此謝過啦~  |
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7樓2012-06-22 20:29:16
2樓2012-06-21 11:36:58
3樓2012-06-21 15:38:43
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ELISA體系是之前實驗人員建立的，標(biāo)準(zhǔn)曲線采用軟件進行四參數(shù)擬合，舉例如圖。 又想了想出現(xiàn)上述情況可能的原因： 1、樣品稀釋 2、從低濃度到高濃度加樣，不換槍頭 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀。落在高吸光值區(qū)間，稍一點偏差對結(jié)果影響就很大。因此在稀釋倍數(shù)準(zhǔn)確的情況下，落在標(biāo)準(zhǔn)曲線變化急劇區(qū)域數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確。即吸光值小的部分結(jié)果準(zhǔn)確。 1、2現(xiàn)在基本可以排除。這兩次進行了自認為非常充分的稀釋過程。之前加樣也是低濃度到高濃度不換槍頭。所以，3的可能性比較大。 |
4樓2012-06-21 23:30:10
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