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jianglay新蟲 (初入文壇)
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[求助]
肥大細(xì)胞類胰蛋白酶測(cè)定
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參考了好幾篇文獻(xiàn)方法都是這么寫的： "類胰蛋白酶活力測(cè)定采用專性底物α-苯甲酰-DL-精氨酸-P-硝基苯胺（BAPAN)。 以20g/l溶于二甲基亞砜，取 加入40μL含待測(cè)液的0.1mol/l反應(yīng)緩沖液1.5ml中，反應(yīng)緩沖液為Tris-HCl（pH7.4 ）。 30℃反應(yīng)20min后，加入0.5ml30%（體積體積）乙酸終止反應(yīng)，在405nm測(cè)光吸收值。以反應(yīng)緩沖液做參比調(diào)零。相對(duì)酶活力單位采用下述公式計(jì)算：（A待測(cè) /A標(biāo)準(zhǔn)） 。配制胰蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。" 問題是我想把細(xì)胞放置在96孔培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng)，通過加入肥大細(xì)胞脫顆粒劑C48/80來使細(xì)胞脫顆粒釋放類胰蛋白酶，我的操作是，50微升細(xì)胞PBS懸液加入96孔板后，加入不同濃度的C48/80刺激物50微升（培養(yǎng)液溶）孵育1小時(shí)候，加入BAPAN，30分鐘后加入乙酸，但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果吸光值不變，感到很詫異，跪求解答~ |
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jianglay
新蟲 (初入文壇)
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2樓2012-06-19 10:14:48
BQ20110430
鐵蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
這個(gè)不是很在行，不過還是祝愿有人幫你指點(diǎn)
3樓2012-06-19 10:23:48
4樓2013-04-29 12:35:42
5樓2013-04-29 12:36:28
6樓2013-04-29 12:37:29
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