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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 肥大細胞類胰蛋白酶測定
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jianglay新蟲 (初入文壇)
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[求助]
肥大細胞類胰蛋白酶測定
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參考了好幾篇文獻方法都是這么寫的： "類胰蛋白酶活力測定采用專性底物α-苯甲酰-DL-精氨酸-P-硝基苯胺（BAPAN)。 以20g/l溶于二甲基亞砜，取 加入40μL含待測液的0.1mol/l反應緩沖液1.5ml中，反應緩沖液為Tris-HCl（pH7.4 ）。 30℃反應20min后，加入0.5ml30%（體積體積）乙酸終止反應，在405nm測光吸收值。以反應緩沖液做參比調零。相對酶活力單位采用下述公式計算：（A待測 /A標準） 。配制胰蛋白酶標準溶液，做標準曲線。" 問題是我想把細胞放置在96孔培養(yǎng)板中進行培養(yǎng)，通過加入肥大細胞脫顆粒劑C48/80來使細胞脫顆粒釋放類胰蛋白酶，我的操作是，50微升細胞PBS懸液加入96孔板后，加入不同濃度的C48/80刺激物50微升（培養(yǎng)液溶）孵育1小時候，加入BAPAN，30分鐘后加入乙酸，但是實驗結果吸光值不變，感到很詫異，跪求解答~ |
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jianglay
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 細胞生物學研究中的新方法
2樓2012-06-19 10:14:48
BQ20110430
鐵蟲 (小有名氣)
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- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
這個不是很在行，不過還是祝愿有人幫你指點
3樓2012-06-19 10:23:48
4樓2013-04-29 12:35:42
5樓2013-04-29 12:36:28
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