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長(zhǎng)白山的夢(mèng)銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)教用過反相硅膠柱分離的高手
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我這個(gè)東西是正丁醇部分提取的東西，之前他們用大孔砍斷效果不好，到我這的時(shí)候就上LH-20試了下，效果不錯(cuò)，但是那個(gè)上樣量太少了160g填料一次上樣不到2g，現(xiàn)在老師讓我換用反相，所以想請(qǐng)教哈有過使用經(jīng)驗(yàn)的同仁們。 1.實(shí)驗(yàn)室的填料都是前兩屆的師兄師姐用過的裝在一些小柱子里的，有幾根都已經(jīng)干了，這個(gè)會(huì)不會(huì)影響使用，怎么處理？而且，還有點(diǎn)臟，用甲醇反復(fù)洗嗎？ 2.填料和上樣量的比大概是多少，我這個(gè)有個(gè)麻煩的是填料都濕的了，質(zhì)量還不好計(jì)算。如果這樣可不可以按柱體積來 3.樣品上樣如何選擇是濕法還是干法上樣 有點(diǎn)羅嗦有點(diǎn)雜，謝謝大家了 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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長(zhǎng)白山的夢(mèng): 金幣+12, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2012-06-21 09:47:21
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長(zhǎng)白山的夢(mèng): 金幣+12, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2012-06-21 09:47:21
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1.實(shí)驗(yàn)室的填料都是前兩屆的師兄師姐用過的裝在一些小柱子里的，有幾根都已經(jīng)干了，這個(gè)會(huì)不會(huì)影響使用，怎么處理？而且，還有點(diǎn)臟，用甲醇反復(fù)洗嗎？ 臟的把柱頭挖了吧！！挖出來的用來拌樣挺好。干了的多用甲醇沖沖。。也可以梯度沖，說不定能把臟東西沖出來，但是梯度不要跨太大。 2.填料和上樣量的比大概是多少，我這個(gè)有個(gè)麻煩的是填料都濕的了，質(zhì)量還不好計(jì)算。如果這樣可不可以按柱體積來 我25g ods最多上過600~800mg吧 3.樣品上樣如何選擇是濕法還是干法上樣 能用初始流動(dòng)相最好了。。。用水更好，反正最好少加甲醇，有一次我用50%甲醇溶樣， 30%甲醇起始濃度，結(jié)果樣品一下子全部泄露了。。悲劇~ 但這和你樣品的性質(zhì)也有關(guān)系，某些樣品，如黃酮苷吧，我感覺50um的ods對(duì)其吸附能力就比較弱。。。。 實(shí)在水難容的就用臟的ods拌樣，舍不得的話就用硅藻土拌樣，硅藻土是別人教的，，，但是如果是加壓的話，記得中間一定要加個(gè)篩板，別吧硅藻土沖到柱子里了。。 也可以上面接一個(gè)超級(jí)小柱子，專門裝拌好的硅藻土和樣品，我就是這么干的。 |
4樓2012-06-20 21:56:03
rose.no.9
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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長(zhǎng)白山的夢(mèng): 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-06-21 09:47:43
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長(zhǎng)白山的夢(mèng): 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-06-21 09:47:43
| 干的反相可以用甲醇或丙酮重生，倒在燒杯里泡一兩個(gè)小時(shí)再重新裝柱，不會(huì)影響效果；臟反相可以用丙酮洗，可以把很多吸附的色素洗下來，然后用甲醇沖洗。填料和上樣的比例很大，具體沒有計(jì)算過。因?yàn)榉聪嘁话闶菑暮枯^高的甲醇水開始洗脫（當(dāng)然也有其他洗脫體系如丙酮乙腈，我們常用這個(gè)），樣品如果不溶于洗脫的初始體系，最好用拌樣的方法，干法上樣。 |
2樓2012-06-20 16:45:41
【答案】應(yīng)助回帖
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長(zhǎng)白山的夢(mèng): 金幣+2, ★有幫助 2012-06-21 09:48:01
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長(zhǎng)白山的夢(mèng): 金幣+2, ★有幫助 2012-06-21 09:48:01
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反相硅膠也叫ODS，用甲醇裝柱子，用甲醇-水做洗脫劑，開始用低濟(jì)度的甲醇，慢慢加大甲醇的量，最后用甲醇沖柱子，用甲醇保存就可以了 還可以用：1，推薦你使用HPLC試試。也是選用反向硅膠柱，流動(dòng)相為乙腈-水或者是甲醇-水。這樣的分離效果和分離效率肯定比你自己裝柱子要高很多倍！而且你的樣品是黃酮類的天然產(chǎn)物，那么它的或是它這一類的化合物的HPLC分離條件文獻(xiàn)中可定有大量記載，你也有參考依據(jù)了！自己裝的反相硅膠柱酯適合于分離極性差別明顯的兩種或三種等樣品的分離，如果要分離物的種類很多的話，是沒有明顯效果。 2， 推薦你使用正相硅膠柱層析方法試試。原理和反向類似，只是出峰順序相反。個(gè)人覺得對(duì)你這種要分離的天然產(chǎn)物，正相硅膠柱層析較反向更有優(yōu)勢(shì)。而且天然產(chǎn)物的這種分離條件文獻(xiàn)中也要大量記載，你可以在參考的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化。 1關(guān)于你說的反相硅膠柱用的應(yīng)該不是中壓色譜系統(tǒng)而是就用了個(gè)泵在跑，那么就沒有紫外檢測(cè)，可以選擇跑柱同時(shí)點(diǎn)板檢測(cè)，所以先判斷你樣品有沒有顏色，如果有，在有顏色時(shí)接的瓶多一些。 2關(guān)于洗脫劑和梯度建議參考文獻(xiàn) 3上樣量一般比較純的話上樣量不大于 0.5g/120g 填料 |
3樓2012-06-20 17:13:26
mlanqiang
木蟲之王 (文學(xué)泰斗)
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5樓2012-06-20 22:34:28
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