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hbaocheng新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
活性污泥中硝酸還原酶和亞硝酸還原酶測(cè)定方法 已有2人參與
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各位蟲(chóng)友： 小弟想測(cè)定一下反應(yīng)器中的污泥的硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的活性。采用的方法是EST上某篇文章中的方法。具體操作過(guò)程是： 1.酶提取 取2ml污泥，用0.01M的磷酸緩沖液（pH為7.4）沖洗3次，然后在20kHZ、4℃下超聲破碎5min，破碎結(jié)束后再12000rpm、4℃下離心10min取上清液，即制得粗酶液。 2. 酶活性測(cè)定 在一干凈的試管中加入適量磷酸緩沖液(pH7.4)，NaNO3或NaNO2、甲基紫精、Na2S2O4至2 mL，它們的最終濃度為0.01M、1mM、1mM、1mM、5mM。加入300uL步驟1制取的粗酶液。然后將試管溫度維持在30℃下反應(yīng)30min。測(cè)定亞硝酸鹽的增加量來(lái)表示硝酸還原酶的活性(NR)，或者測(cè)定亞硝酸鹽的減少量來(lái)表示亞硝酸還原酶的活性(NIR)。硝酸還原酶的活性用umol NO2--N/(min•mg蛋白質(zhì))表示，亞硝酸還原酶的活性用umol NO2--N/(min•mg蛋白質(zhì))。 我用這個(gè)方法反復(fù)取樣測(cè)定了好多次了，即使水浴了5h，也不見(jiàn)有明顯的硝酸鹽或者亞硝酸鹽的還原。這個(gè)到底是怎么回事。不知有高手可給小弟解惑。是體系不對(duì)麼？ 或者如果哪位大蝦有比較好的測(cè)定方法，也可以給小弟推薦一下。發(fā)郵箱也行的，hbaocheng@163.com 真的是不勝感激啊，小弟最近為這事兒都急死了，一直就測(cè)不出來(lái)，實(shí)驗(yàn)受挫啊，老板又該說(shuō)了。。。。 |
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 污水處理 |
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2樓2012-06-28 11:34:36
hbaocheng
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完全沒(méi)有。。。 沒(méi)人關(guān)注啊，貌似。。。。 5樓2012-07-16 14:49:57
yxx_sari
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