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lihao1988903金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于噬菌體侵染細(xì)菌
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| 最近做的兩次微生物發(fā)酵罐發(fā)酵都被噬菌體侵染了。我們做的是30L 大腸桿菌發(fā)酵，接種到發(fā)酵罐一切正常，菌種生長(zhǎng)到一定OD后，溶氧就急劇上升并OD下降到1一下，菌液變清亮。因?yàn)榈谝淮挝廴竞髮ｉT對(duì)環(huán)境和設(shè)備又做了次消毒處理，結(jié)果第二次還是污染了。我想請(qǐng)問(wèn)各位大蝦，噬菌體會(huì)在什么時(shí)候侵染了大腸桿菌？侵染了大腸桿菌后多長(zhǎng)時(shí)間才會(huì)釋放出來(lái)使OD下降？因?yàn)榻臃N以后，發(fā)酵罐沒(méi)有開(kāi)過(guò)口，會(huì)被污染嗎？如果是濾器進(jìn)去的為啥剛接種是沒(méi)有呢？各位大蝦分析下是什么時(shí)候被污染噬菌體的呢？ |
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這原因就多了去， 之前我發(fā)酵經(jīng)常是發(fā)酵到2-3小時(shí)DO快速上升（不要懷疑缺糖這種低級(jí)原因），OD直接從接近8降到1以下，有時(shí)是小罐很好，轉(zhuǎn)接到大罐立馬就掛，還有時(shí)是發(fā)酵著，長(zhǎng)得很慢，離心不干爽，每周至少5罐，發(fā)酵了6個(gè)多月，什么樣的問(wèn)題都碰到了，和噬菌體做了長(zhǎng)期的斗爭(zhēng)。 很顯然你是感染了噬菌體，但原因是多方面的： 種子帶噬菌體； 氨芐帶噬菌體； 消罐后有尾壓掉0現(xiàn)象； 接種時(shí)瓶口帶菌； 接種時(shí)通氣不足； …… 別以為種子帶噬菌體很好決解，如果是溶原性侵染會(huì)讓你頭大，有時(shí)死，有時(shí)不死，讓你一切分析、找原因都困難。 一開(kāi)始我是從頭查到尾，逐處檢驗(yàn)有沒(méi)有噬菌斑，種子里查噬菌斑沒(méi)有才上罐，罐子實(shí)消后不接種兩天后鏡檢無(wú)菌才上罐，上罐后更是每小時(shí)都無(wú)菌取樣檢測(cè)噬菌斑，以為種子檢測(cè)到噬菌斑了就沒(méi)事，后來(lái)還是死。 唉，后來(lái)發(fā)現(xiàn)先是感染烈性噬菌體，死得準(zhǔn)時(shí)，死得快，后來(lái)種子一一檢測(cè)，沒(méi)烈性噬菌體再上罐，成功率上升不少，但有時(shí)死，有時(shí)不死，有時(shí)是半死不活（長(zhǎng)的慢，菌濃低，離心效果不好）。從買菌種到分子過(guò)程重新仔細(xì)做，才完事了。 |
14樓2012-08-14 20:04:29
421095972
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6樓2012-06-29 08:47:43
8樓2012-07-01 15:26:55
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2樓2012-06-28 14:55:51
371522029
金蟲 (正式寫手)
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amisking: MicEPI+1 2012-06-28 20:09:41
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首先我建議你不能這么武斷的認(rèn)為是噬菌體。接種的時(shí)候接種口用棉花蘸酒精點(diǎn)燃，然后接種。生長(zhǎng)到OD值還沒(méi)有下降，或者剛剛下降不久馬上進(jìn)行一次補(bǔ)料，補(bǔ)料后觀察OD值是否繼續(xù)下降，補(bǔ)料的培養(yǎng)基是很濃的，控制好體積，并滅好菌。補(bǔ)料后如果發(fā)現(xiàn)OD值只有少量上升，并且沒(méi)維持多久就繼續(xù)飛速下降那么就可能是污染了，補(bǔ)料后OD值上升，溶解氧下降，稱現(xiàn)一定規(guī)律，則表明之前是培養(yǎng)基耗盡。 如果證明了有很大可能是污染為了確認(rèn)，你可以先用沒(méi)有污染的菌做涂布，菌濃度大培養(yǎng)使得形成菌苔，然后在菌苔表面涂幾個(gè)點(diǎn)（用接種環(huán)）的懷疑污染了的培養(yǎng)基，培養(yǎng)，看看是否會(huì)出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。（既原來(lái)看到完整的菌苔，在接種后出現(xiàn)了空的溶菌斑）如果出現(xiàn)了溶菌現(xiàn)象則確實(shí)證明了是噬菌體。如果是噬菌體的話就比較討厭了。需要對(duì)所有可能的物品進(jìn)行消毒。（不是滅菌）包括房間，容器，器皿等等。 |
3樓2012-06-28 19:38:32
李曉宏?yáng)|華
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| ，你可以先用沒(méi)有污染的菌做涂布，菌濃度大培養(yǎng)使得形成菌苔，然后在菌苔表面涂幾個(gè)點(diǎn)（用接種環(huán)）的懷疑污染了的培養(yǎng)基，培養(yǎng)，看看是否會(huì)出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。（既原來(lái)看到完整的菌苔，在接種后出現(xiàn)了空的溶菌斑）如果出現(xiàn)了溶菌現(xiàn)象則確實(shí)證明了是噬菌體。如果是噬菌體的話就比較討厭了。需要對(duì)所有可能的物品進(jìn)行消毒。（不是滅菌）包括房間，容器，器皿等等。 |
4樓2012-06-28 20:23:27
李曉宏?yáng)|華
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5樓2012-06-28 20:24:08
lihao1988903
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9樓2012-07-01 20:53:07
lihao1988903
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