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[求助]
Ni-NTA純化蛋白
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| 用Ni柱純化帶His-tag的蛋白,看說明書上說如果是純化相同的蛋白用0.5M的NaOH洗30min就行。我想知道如果是純化不同的蛋白呢,那我要把樹脂都扔了換新的嗎?還是需要怎么處理一下才能純化另一種新的蛋白呢 請知道的大神指導一下吧 |
細胞生物學實驗經(jīng)驗 | 【分子生物】EPI帖 |

金蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
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我覺得,首先你要先弄清楚你的目的,你是要清洗柱子還是要再生柱子。 我給你點建議啊: 1.平常清洗(每次使用后,就算下次用在不同蛋白純化上也適用。) 先用500mM咪唑沖洗3-5個柱體積,然后立即用純水平衡5個柱體積。 2.每月清洗(一個月或者使用15次左右,柱子載量有所下降時,記住是載量下降了,所以,你說的方法不是常規(guī)的清晰方法。) 0.2M NaOH 沖洗2個柱體積,室溫放置一夜或37℃放置2h。再用純水平衡至少5個柱體積。 3.掛鎳再生(柱子堵塞,壓力升高,載量顯著下降時),這個就比較麻煩了,需要的話再給你。 |
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