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[求助]
Ni-NTA純化蛋白
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| 用Ni柱純化帶His-tag的蛋白，看說明書上說如果是純化相同的蛋白用0.5M的NaOH洗30min就行。我想知道如果是純化不同的蛋白呢，那我要把樹脂都扔了換新的嗎？還是需要怎么處理一下才能純化另一種新的蛋白呢 請知道的大神指導(dǎo)一下吧 |
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 細(xì)胞生物學(xué)實驗經(jīng)驗 | 【分子生物】EPI帖 |
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木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
1949stone: MolEPI+1, 支持 2012-06-29 13:05:50
da_da: 金幣+3 2012-06-29 18:52:50
da_da: 金幣+4 2012-08-30 10:13:29
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da_da: 金幣+4 2012-08-30 10:13:29
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我覺得，首先你要先弄清楚你的目的，你是要清洗柱子還是要再生柱子。 我給你點建議啊： 1.平常清洗（每次使用后，就算下次用在不同蛋白純化上也適用。） 先用500mM咪唑沖洗3-5個柱體積，然后立即用純水平衡5個柱體積。 2.每月清洗（一個月或者使用15次左右，柱子載量有所下降時，記住是載量下降了，所以，你說的方法不是常規(guī)的清晰方法。） 0.2M NaOH 沖洗2個柱體積，室溫放置一夜或37℃放置2h。再用純水平衡至少5個柱體積。 3.掛鎳再生（柱子堵塞，壓力升高，載量顯著下降時），這個就比較麻煩了，需要的話再給你。 |
4樓2012-06-29 10:07:18
路基亞的暴誕
金蟲 (正式寫手)
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2樓2012-06-28 22:32:15
3樓2012-06-28 23:40:00
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