loveskyzhou

鐵蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
金幣: 43.2
帖子: 316
在線: 49.1小時
蟲號: 1346820

[交流] 蛋白不純，如圖，大家?guī)兔Ψ治鲆幌?

蛋白幾個月之前還很純，就一條主帶和一點點的雜帶。但慢慢的好像菌種退化了，表達(dá)的蛋白如圖，上邊有好多類似多聚的東西，但跑膠應(yīng)該變性了才對啊。我用的是rosetta表達(dá)，蛋白不穩(wěn)定很容易沉淀，但過了離子交換后加DTT沉淀情況明顯減輕，大家?guī)兔Ψ治鲆幌掳�，這東西真蛋疼。。。。。

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費? 已經(jīng)有287人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:

求幫忙分析一下這三個紅外圖譜，謝謝。有【金幣】贈送。。。。。已經(jīng)有14人回復(fù)
做的TPD的表征圖，基線很不穩(wěn) ，大家?guī)兔纯捶治鲆幌拢粍俑屑ぃ。?/a> 已經(jīng)有5人回復(fù)

大家?guī)兔纯次业牡鞍纂娪居心康膸?/a> 已經(jīng)有10人回復(fù)

大家?guī)兔Ψ治鱿码p向電泳結(jié)果不好的原因（有圖）已經(jīng)有11人回復(fù)
碳管酸化后的紅外圖，大家?guī)兔Ψ治鱿掳桑。?/a> 已經(jīng)有10人回復(fù)

請大家?guī)兔Ψ治鲆幌逻@個質(zhì)譜圖已經(jīng)有19人回復(fù)
請大家?guī)兔Ψ治鱿挛业腟DS-PAGE蛋白檢測膠啊已經(jīng)有26人回復(fù)
大家?guī)兔Ψ治鲆幌挛业牡鞍准兓瘯r出現(xiàn)的問題吧，不勝感激已經(jīng)有5人回復(fù)
大家?guī)兔Ψ治鲆幌翽CR電泳圖已經(jīng)有14人回復(fù)
關(guān)于工作選擇，希望大家?guī)兔Ψ治鲆幌?/a> 已經(jīng)有130人回復(fù)

【求助】這是我的一個樣品的DSC圖，大家?guī)兔Ψ治鲆幌掳�，謝謝了已經(jīng)有3人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2012-06-30 16:20:43

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

kwkw

木蟲 (著名寫手)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 5746.5
帖子: 1359
在線: 288.6小時
蟲號: 136520

★
loveskyzhou(金幣+1): 謝謝參與

你加了DTT不影響蛋白質(zhì)的活性嗎？

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2012-07-01 08:24:24

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

strive123123

禁蟲 (文壇精英)

★
loveskyzhou(金幣+1): 謝謝參與
1949stone: 啥意思？ 2012-07-03 07:45:58

本帖內(nèi)容被屏蔽

3樓2012-07-01 10:34:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

八頭小豬

鐵桿木蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 4 (幼兒園)
金幣: 5323.3
帖子: 168
在線: 260.9小時
蟲號: 1038414

★
loveskyzhou(金幣+1): 謝謝參與

你用的是什么菌種？什么質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的？

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2012-07-01 11:11:02

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

675250244

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 334.1
帖子: 288
在線: 114.6小時
蟲號: 782295

★ ★
loveskyzhou(金幣+1): 謝謝參與
1949stone: 金幣+1, 鼓勵 2012-07-03 07:46:14

蛋白marker貼出來看看，我認(rèn)為上面的雜帶不是目的蛋白的多聚體，跑電泳時煮過而且上樣buffer中加了巰基乙醇是不可能形成多聚體的

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2012-07-01 12:12:17

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

loveskyzhou

鐵蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
金幣: 43.2
帖子: 316
在線: 49.1小時
蟲號: 1346820

引用回帖:

4樓: Originally posted by 八頭小豬 at 2012-07-01 11:11:02
你用的是什么菌種？什么質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的？

Ecoli ROSETTA的~ 28a的質(zhì)粒

贊一下

回復(fù)此樓

6樓2012-07-01 14:22:24

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

loveskyzhou

鐵蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
金幣: 43.2
帖子: 316
在線: 49.1小時
蟲號: 1346820

引用回帖:

2樓: Originally posted by kwkw at 2012-07-01 08:24:24
你加了DTT不影響蛋白質(zhì)的活性嗎？

沒有影響，我覺得可能是DTT部分打開了蛋白分子間的二硫鍵，一定程度穩(wěn)定了蛋白，這樣解釋可能嗎

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2012-07-01 14:23:20

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

loveskyzhou

鐵蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
金幣: 43.2
帖子: 316
在線: 49.1小時
蟲號: 1346820

引用回帖:

5樓: Originally posted by 675250244 at 2012-07-01 12:12:17
蛋白marker貼出來看看，我認(rèn)為上面的雜帶不是目的蛋白的多聚體，跑電泳時煮過而且上樣buffer中加了巰基乙醇是不可能形成多聚體的

我覺得應(yīng)該也煮開了啊~最下面的是我的目的條帶，大概26KD 中間那條大概55KD, 上面的幾個就難說了。。。。。

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2012-07-01 14:25:29

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

yingying1588

木蟲之王 (文學(xué)泰斗)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 63562.9
帖子: 88063
在線: 1554.9小時
蟲號: 688753

★
loveskyzhou(金幣+1): 謝謝參與

沒有影響。

回復(fù)此樓

9樓2012-07-01 21:51:03

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

xiangquanju

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 1519.7
帖子: 295
在線: 153.2小時
蟲號: 999190

★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
1949stone: 金幣+3, 可以多多交流 2012-07-03 07:46:42

引用回帖:

確定電泳加了buffer經(jīng)高溫煮過，就不能形成多聚體了么？
因為我有一個蛋白，跑電泳的時候老是有二聚體在，我做質(zhì)譜檢測就是我的目的蛋白

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2012-07-02 01:56:54

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

xiangquanju

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 1519.7
帖子: 295
在線: 153.2小時
蟲號: 999190

★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 股交流 2012-07-03 15:21:17

lz，下面量最多的應(yīng)該是你的目的蛋白吧，我感覺中間那個應(yīng)該是你蛋白的二聚體或者其他具體，具體要看分子量
因為你點樣太多，所以難免會有一些雜帶，你可以嘗試減少上樣量，應(yīng)該跑出來的效果就會好一些，你提取的蛋白主要是拿來做什么的呢？

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2012-07-02 01:58:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

loveskyzhou

鐵蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
金幣: 43.2
帖子: 316
在線: 49.1小時
蟲號: 1346820

引用回帖:

11樓: Originally posted by xiangquanju at 2012-07-02 01:58:55
lz，下面量最多的應(yīng)該是你的目的蛋白吧，我感覺中間那個應(yīng)該是你蛋白的二聚體或者其他具體，具體要看分子量
因為你點樣太多，所以難免會有一些雜帶，你可以嘗試減少上樣量，應(yīng)該跑出來的效果就會好一些，你提取的蛋 ...

做晶體，所以希望純度高些，變性膠二聚應(yīng)該解開了啊

贊一下

回復(fù)此樓

12樓2012-07-02 04:44:56

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖