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rfz1989金蟲 (初入文壇)
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[求助]
基因敲除問題請教，都是假陽性，根本篩不到突變株
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位高手，我目前做空腸彎曲菌缺失株這一塊。 我以T載體作為自殺質(zhì)粒（對空彎而言），構(gòu)建敲除基因的上下游臂，各1000bp，將其拼接連接到他T載體中，然后電轉(zhuǎn)化導入空腸彎曲菌中，先以T載體上的AMP抗性篩一次同源重組，PCR鑒定以有兩條帶(野生型，突變性)為陽性，這一步就很多假陽性，好不容易篩到一次同源重組后，在無抗板子上傳代篩二次同源重組，傳了一代就發(fā)現(xiàn)所有菌落都回復了，只有野生型一條帶。 做了好長時間了，一直沒有進展，大家有沒有什么好的建議��？ 一次同源重組 |
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stue
鐵蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 病原微生物變異與耐藥
2樓2012-09-12 23:21:23
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