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greatwall201銅蟲 (小有名氣)
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求助亞硝酸還原酶測定方法
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2樓2012-07-08 17:00:37
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NiR 活性分析按照 Rao 等(1981)方法，由亞硝酸的用量決定。反應(yīng)最終體積為 1.35mL，其中包括：1mL 100mM鉀-磷酸緩沖液，pH 7.5，0.05 mL 10 mM 的KNO2，0.05 mL 甲基紫精（15mg/mL 的鉀-磷酸緩沖液）；蒸餾水 0.05 mL；最后加酶提取物 0.15 mL。反應(yīng)通過加 0.05 mL 連二亞硫酸鈉鹽啟動(50 mg/mL)，在 25℃下反應(yīng) 30 分鐘后，至甲基紫精顏色消失，取 0.2mL 反應(yīng)液用蒸餾水快速稀釋到 6.7mL，加入用 3N HC1 配置的 10% (w/v)磺胺 1.8 mL和 1% (w/v)鹽酸萘乙二胺 1.5mL。在加入這些二氮偶合試劑 15 分鐘后，測定 540 nm 吸光率。亞硝酸的量通過亞硝酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計算。 |
4樓2012-07-10 10:09:35
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