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有關(guān)羰基還原酶酶活測(cè)定中的幾個(gè)問(wèn)題
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| 小弟做的是NADPH依賴型羰基還原酶，該酶在還原底物的過(guò)程中消耗NADPH。文獻(xiàn)中測(cè)酶活是在A340nm處讀到1min內(nèi)的吸光度的降低的數(shù)值。反應(yīng)總體系為250ul，包括100mmol/L磷酸鉀緩沖液PH6.0，底物終濃度1mmol，輔酶NADPH終濃度0.25mmol和適量酶液。具體反映為將緩沖液，底物和輔酶依次加入后30度保溫2min，加入適量酶液后讀取1min內(nèi)的A340nm處的吸光值的下降�？墒切〉茉谂渲幂o酶NADPH時(shí)出現(xiàn)了問(wèn)題，先前是用100mmol/L磷酸鉀緩沖液PH6.0配置的，第二天就沒(méi)有吸光值了，查了相關(guān)帖子，說(shuō)NADPH在磷酸鉀緩沖液中不穩(wěn)定，會(huì)氧化，有人說(shuō)用Tris-HCL配置，可是反應(yīng)體系是磷酸鉀緩沖液PH6.0，不知會(huì)有影響么，還有NADPH緩沖液怎么保存，配置成母液么？急急急！ |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
史前五百年: 金幣+10 2013-07-22 09:21:50
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
史前五百年: 金幣+10 2013-07-22 09:21:50
我們實(shí)驗(yàn)室有人做的 一般緩沖液用tris-HCL 效果比鈉鹽與鉀鹽的緩沖液好一點(diǎn) 另外輔酶的話一般可以配成母液的 保存在-40度冰箱中 一般沒(méi)問(wèn)題的 不過(guò)注意用量最好不要長(zhǎng)期保存 另外輔酶購(gòu)買也要注意 有問(wèn)題的更換廠家試試 因?yàn)楹枚喙镜妮o酶都是進(jìn)口分裝的 所以在這個(gè)過(guò)程可能會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題 如果不是反應(yīng)體系的問(wèn)題 就是輔酶本身的問(wèn)題 保存不當(dāng)或者廠家質(zhì)量等其他原因 我們這邊開(kāi)反應(yīng)出現(xiàn)過(guò)好多次問(wèn)題 一般都在輔酶的原因  |
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史前五百年2樓2013-07-21 18:18:16
3樓2013-07-22 00:05:21
wswsjz
木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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祝福，祝福，美好的未來(lái)在向你招手�。�！
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6樓2013-07-23 00:07:32
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laoguai123
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9樓2013-08-26 14:22:31
10樓2013-08-26 21:11:44
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