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有關(guān)羰基還原酶酶活測定中的幾個(gè)問題
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| 小弟做的是NADPH依賴型羰基還原酶，該酶在還原底物的過程中消耗NADPH。文獻(xiàn)中測酶活是在A340nm處讀到1min內(nèi)的吸光度的降低的數(shù)值。反應(yīng)總體系為250ul，包括100mmol/L磷酸鉀緩沖液PH6.0，底物終濃度1mmol，輔酶NADPH終濃度0.25mmol和適量酶液。具體反映為將緩沖液，底物和輔酶依次加入后30度保溫2min，加入適量酶液后讀取1min內(nèi)的A340nm處的吸光值的下降�？墒切〉茉谂渲幂o酶NADPH時(shí)出現(xiàn)了問題，先前是用100mmol/L磷酸鉀緩沖液PH6.0配置的，第二天就沒有吸光值了，查了相關(guān)帖子，說NADPH在磷酸鉀緩沖液中不穩(wěn)定，會(huì)氧化，有人說用Tris-HCL配置，可是反應(yīng)體系是磷酸鉀緩沖液PH6.0，不知會(huì)有影響么，還有NADPH緩沖液怎么保存，配置成母液么？急急急！ |
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祝福，祝福，美好的未來在向你招手�。�！
4樓2013-07-22 00:47:12
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
史前五百年: 金幣+10 2013-07-22 09:21:50
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
史前五百年: 金幣+10 2013-07-22 09:21:50
我們實(shí)驗(yàn)室有人做的 一般緩沖液用tris-HCL 效果比鈉鹽與鉀鹽的緩沖液好一點(diǎn) 另外輔酶的話一般可以配成母液的 保存在-40度冰箱中 一般沒問題的 不過注意用量最好不要長期保存 另外輔酶購買也要注意 有問題的更換廠家試試 因?yàn)楹枚喙镜妮o酶都是進(jìn)口分裝的 所以在這個(gè)過程可能會(huì)出現(xiàn)問題 如果不是反應(yīng)體系的問題 就是輔酶本身的問題 保存不當(dāng)或者廠家質(zhì)量等其他原因 我們這邊開反應(yīng)出現(xiàn)過好多次問題 一般都在輔酶的原因  |
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史前五百年2樓2013-07-21 18:18:16
3樓2013-07-22 00:05:21
5樓2013-07-22 09:21:14
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