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soffy0214銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
植物RNA提取電泳圖，求解析！
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植物RNA提取電泳圖，求解析！提了很長時間，不是多條帶就是邊緣模糊帶，不知道是降解還是電泳條件和膠沒制好？以前我用氯仿只抽提一次，發(fā)現(xiàn)帶很亮，而且有五條，后來就用氯仿抽提兩次，出現(xiàn)三條帶，可是邊緣模糊。好像我一直以來跑的電泳帶都是比較模糊的，不知道是什么原因？ [ Last edited by soffy0214 on 2012-7-10 at 21:54 ] |
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lele1983
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2樓2012-07-10 22:29:08
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+5, 鼓勵積極應(yīng)助，解答問題 2012-07-13 16:16:00
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| 看你的電泳結(jié)果，RNA沒有問題的。感覺是電泳跑的不太好條帶模糊。像是電泳液緩沖能力不太好，不知道是不是電泳液不新鮮導(dǎo)致。另外，你所說的5條帶這里沒有圖就看不出來到底是怎么回事。RNA只要不降解，做一般實驗是沒有問題的。你的膠看起來是普通的膠，沒有加變性劑，加入變性劑后，很容易看到28S是18S的兩倍的關(guān)系，更加可以確定沒有降解發(fā)生。如果實在不放心，可以再測一下OG，260/280如果在1.8到2.0之間就沒有問題。超過2.0說明還是有降解。還有就是據(jù)我個人的經(jīng)驗，植物組織RNA不需要多次用氯仿抽提，因為氯仿在這里的作用，一個是去除痕量酚，另外要去除脂質(zhì)，第三個作用就是增大有機(jī)相的比重，在實驗中沒有意外發(fā)生，抽提一次足矣。希望對你有幫助 |
3樓2012-07-13 10:16:31
dingxiuying
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-07-13 16:16:11
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-07-13 16:16:11
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我跑過的RNA三條帶或五條帶的都有，因為組織中有葉綠體或線粒體的RNA也被提取出來了。不論幾條帶，判斷標(biāo)準(zhǔn)是一樣的，只要28S和18s兩條帶比較清晰，且亮度比接近1:1或2:1，而最小的5s比較弱的話，說明RNA提取質(zhì)量還可以，再配合OD值來判斷，就能確定RNA是否可用于后續(xù)試驗。 樓主的電泳極有可能是膠的問題，建議重新配制電泳buffer和膠試試。另外，RNA電泳不能跑太長時間，指示劑移出加樣孔大約2-3cm就可以看膠了，時間太長容易模糊，電壓不能太大，4-5V/cm膠長就行。 |
4樓2012-07-13 14:02:42
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