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llp159848新蟲 (小有名氣)
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[求助]
急求：怎樣確定蛋白和肽有沒有結(jié)合？
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| 怎樣確定一個(gè)4000多分子量的蛋白，是否與700多分子量的肽結(jié)合了？ |
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 肽類前處理 |
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lzjessie_wlf
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7樓2012-07-12 22:58:39
houqian387
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2樓2012-07-11 17:50:35
lzjessie_wlf
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【答案】應(yīng)助回帖
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簡單的化，直接用MS檢測。 配置不同ratio的蛋白和肽，使用MALDI和ESI檢測。 如果能檢測到兩個(gè)分子量之和，那么判斷有可能結(jié)合了。 同時(shí)（或然后）做對比實(shí)驗(yàn)，比如配置相同的溶液，分別不含蛋白或者肽。 尤其是分子量小的肽，以免肽自身在某個(gè)濃度的溶液中形成multiplemer與其他小分子的complex，最后分子量與蛋白和肽的分子量之和類似。 MALDI可以直接檢測到single charged的complex 峰。 ESI的化看機(jī)器的檢測范圍。如果檢測范圍小于4000,那么直接檢測到的是multiple charged 的分子量，最后通過人工或機(jī)器deconvolution推到出single charged 的分子離子峰。 然后使用LC-MS 分離檢測，如果LC-MS能夠分離檢測到，那么就可以做NMR。對特殊的hydrogen bond進(jìn)行表征。 最后，還可以培養(yǎng)結(jié)合后蛋白和肽的共晶，使用X-ray檢測。 總結(jié)，查相關(guān)類似文獻(xiàn)。 |
3樓2012-07-11 21:44:41
llp159848
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4樓2012-07-12 10:12:21
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