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llp159848新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
急求：怎樣確定蛋白和肽有沒(méi)有結(jié)合？
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| 怎樣確定一個(gè)4000多分子量的蛋白，是否與700多分子量的肽結(jié)合了？ |
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lzjessie_wlf
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9樓2012-07-13 20:41:10
houqian387
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2樓2012-07-11 17:50:35
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【答案】應(yīng)助回帖
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簡(jiǎn)單的化，直接用MS檢測(cè)。 配置不同ratio的蛋白和肽，使用MALDI和ESI檢測(cè)。 如果能檢測(cè)到兩個(gè)分子量之和，那么判斷有可能結(jié)合了。 同時(shí)（或然后）做對(duì)比實(shí)驗(yàn)，比如配置相同的溶液，分別不含蛋白或者肽。 尤其是分子量小的肽，以免肽自身在某個(gè)濃度的溶液中形成multiplemer與其他小分子的complex，最后分子量與蛋白和肽的分子量之和類(lèi)似。 MALDI可以直接檢測(cè)到single charged的complex 峰。 ESI的化看機(jī)器的檢測(cè)范圍。如果檢測(cè)范圍小于4000,那么直接檢測(cè)到的是multiple charged 的分子量，最后通過(guò)人工或機(jī)器deconvolution推到出single charged 的分子離子峰。 然后使用LC-MS 分離檢測(cè)，如果LC-MS能夠分離檢測(cè)到，那么就可以做NMR。對(duì)特殊的hydrogen bond進(jìn)行表征。 最后，還可以培養(yǎng)結(jié)合后蛋白和肽的共晶，使用X-ray檢測(cè)。 總結(jié)，查相關(guān)類(lèi)似文獻(xiàn)。 |
3樓2012-07-11 21:44:41
llp159848
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4樓2012-07-12 10:12:21
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