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jilly新蟲 (小有名氣)
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[求助]
真菌DNA提取疑惑
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提取步驟如下： 1、用提取裂解緩沖液（2%TRITON、1%SDS、100mM Tris-HCl (pH8.0), 50mM EDTA (pH8.0), 500mM NaCl）300uL懸浮菌體； 2、向Epperdofr管中加入0.5克的玻璃珠和50uL的10%SDS，在渦旋器上以其最大速率渦旋10--20min； 3、加入2倍體積即600uL的6.5M異硫氫酸胍（含50mM Tris-Cl，pH為5.8），充分混勻后，12000RPM離心3分鐘 4、吸取上清加300--400uL的異丙醇，充分混勻后分兩次上柱，12000RPM離心30秒； 5、70%酒精洗滌一次，12000RPM離心30秒 6、倒掉酒精后，12000RPM離心2分鐘 7、加入50UL 10mM Tris，12000RPM離心45秒 8、點(diǎn)10UL電泳 結(jié)果：用1OD 1ML大腸桿菌來做，提的DNA濃度高，有10-20ng/uL 用1OD 1ML煙曲霉來做，卻提不出任何DNA，但玻璃珠振蕩裂解后，加無水乙醇直接沉淀，點(diǎn)電泳，卻能看見亮帶。（不知道為何會(huì)這樣的結(jié)果） 為什么會(huì)是這樣的結(jié)果呢，希望有人幫幫我。先謝了 |
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jilly
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