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梔子花1120新蟲 (初入文壇)
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[求助]
電泳條帶很淡，能用于割膠回收嗎
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我的電泳圖條帶很暗，我想做割膠回收，不知道條帶淡了，做回收有沒有意義？ 還有請(qǐng)高人分析一下為什么我的電泳條帶會(huì)這么淡啊 ，我的DNA用的是試劑盒提的，濃度比較低，只有20~30ng/ul.但是配50ul的體系時(shí)，我加了4ul。應(yīng)該怎樣改善，才能得到比較好的條帶呢，O(∩_∩)O謝謝了 |
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reallpf
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 歡迎交流經(jīng)驗(yàn) 2012-07-16 15:24:12
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 歡迎交流經(jīng)驗(yàn) 2012-07-16 15:24:12
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首先可以肯定電泳條帶較淡，仍然是可以回收的。 根據(jù)情況給你一下個(gè)人建議： 對(duì)于提質(zhì)粒： buffer 2處理時(shí)間久一些，2min為宜。Washing buffer只洗脫一次。加Elution buffer后將柱子放于60度2min，高速離心洗脫�？梢杂行岣咛岬觅|(zhì)粒濃度。 對(duì)于PCR： 可以適當(dāng)增加1-5個(gè)循環(huán)。增加PCR管數(shù)。降低退火溫度。利用PCR產(chǎn)物，稀釋（50、100、200）倍后做模版再做PCR。 對(duì)于膠回收： 割膠后加入buffer 60度溶膠后一定冰浴2min（增加DNA與柱子的結(jié)合率）。加Elution buffer后將柱子放于60度2min，高速離心洗脫。 |
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梔子花11206樓2012-07-16 14:37:57
dingxiuying
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8樓2012-07-17 22:06:44
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