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hkxya7金蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌株活化
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| 我用的菌在斜面培養(yǎng)基上已經(jīng)培養(yǎng)了接近八年的時(shí)間了，這株菌好像是一直保存在零下4度甘油中。我拿該菌劃平面還有液體培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)該菌還是長(zhǎng)著很好的而且長(zhǎng)著很快。所以我想問的是該菌還需不需要進(jìn)一步活化！請(qǐng)各位給點(diǎn)意見。。。。 |
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2樓2012-07-14 10:49:57
zd1213
銀蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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rainwander: 金幣+3, 鼓勵(lì)新蟲交流 2012-07-14 12:52:41
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不清楚你這個(gè)菌是不是需要發(fā)酵合成某種產(chǎn)物的？還是只是需要累積菌體？ 如果是前者的話就要發(fā)酵一下看你產(chǎn)物的產(chǎn)量是否下降，或者連續(xù)傳幾代之后是否有產(chǎn)量下降的趨勢(shì)，如果出現(xiàn)這種情況就是需要活化了，而不是簡(jiǎn)單的看菌體生長(zhǎng)好壞。 建議每次劃線分離挑取活力最高的單菌落進(jìn)行活化菌種，這個(gè)對(duì)工業(yè)菌種很重要。 工業(yè)菌種的甘油管最好能保藏在-80度冰箱，如果是模式菌對(duì)產(chǎn)物產(chǎn)量沒要求保藏在-20度也可以。我們實(shí)驗(yàn)室搞工業(yè)菌種很多，就是這么弄的。 |
3樓2012-07-14 11:49:50
4樓2012-07-14 12:08:20
reallpf
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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菌種保藏實(shí)驗(yàn)室大多用斜面和甘油管。一般斜面保藏方法應(yīng)該1-2月活化一次，而甘油管存于-20度和-80度是可以保藏?cái)?shù)年的。 對(duì)于菌種的活化，如果是斜面，那么平板劃線或者接種液體培養(yǎng)基都o(jì)k。大多活化出現(xiàn)問題是在保藏的甘油管。因?yàn)楦视凸芤话愣啻文贸鼋泳�，容易造成染菌。時(shí)間久也或多或少降低菌種活力，所以接種甘油管到液體培養(yǎng)基一般長(zhǎng)得較平板會(huì)慢一些。 對(duì)于你的情況，個(gè)人建議因?yàn)榇嬗?度，而且時(shí)間很久，最好用平板劃線多活化幾次，另外如有有抗性篩選，特異目的基因等的話，再進(jìn)行抗性篩選和基因PCR。如果是大腸保存質(zhì)粒或表達(dá)的，能夠提質(zhì)粒酶切鑒定自然是最好的。總的來說，你的菌應(yīng)該多活化幾次同時(shí)鑒定一下。 |
5樓2012-07-14 17:51:35
mada1986
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6樓2012-07-16 09:37:05
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