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[求助]
請幫忙分析一下提取RNA遇到的問題
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我實驗室的Trizol提取RNA，氯仿分層以后，提取上清液，加入異丙醇時，出現(xiàn)大量渾濁懸浮白色沉淀，而且離心后發(fā)現(xiàn)管底有一大坨白色物質(zhì)，量很大，應(yīng)該不是RNA那種透明的膠狀沉淀。這個沉淀很難溶解，我加了500微升的水才完全溶解。 我以前提的效果很好，不知道這幾次到底是什么原因？請幫忙分析一下！ 另外，我又買promega試劑盒Z3100，提取RNA，效果也不是很好，我的下游主要是做PCR。 我以前提的效果很好，不知道這幾次到底是什么原因？請幫忙分析一下！ 電泳圖見附件，第2，3泳道是用Trizol提的，4，5泳道是用試劑盒提的！ 如果做PCR的話，后兩個泳道的RNA可以用嗎？可以直接進行一步法PCR嗎？ 謝謝！ |
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小蟲子666
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 鼓勵熱心的蟲蟲，積極交流經(jīng)驗 2012-07-18 13:53:40
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小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 鼓勵熱心的蟲蟲，積極交流經(jīng)驗 2012-07-18 13:53:40
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12泳道也不是完全降解，降解的話應(yīng)該彌散的帶，你這個還能看到2條主帶，3 4泳道，我認(rèn)為完全可以做反轉(zhuǎn)錄，做PCR。 下面是我用trizol提植物RNA的一些建議： 用trizol提的時候，加入trizol后充分裂解，離心裂解破碎的細胞雜質(zhì)， 吸上清后，再加氯仿抽取，再加異丙醇沉淀。如果認(rèn)為雜質(zhì)還是很多，可以重復(fù)用氯仿抽取數(shù)次，然后再沉淀。最后一次氯仿抽提，吸上清切記不用洗到中間層。沉淀RNA，離心后，若不見膠狀沉淀，也不要認(rèn)為RNA沒有，用30微升DEPC水反復(fù)吹打并沖洗管壁。 是提植物RNA嗎？ 研磨的樣品可以多點，1.5ml管我一般是裝到0.3-0.5ml 加1ml trizol 我做的是大豆 根莖葉 種子用trizol 都有不錯的結(jié)果 。 根 莖 trizol 最好提了。 物種不同方法也不同用的RNA試劑也不同，棉花高酚的用trizol 就不行。自己再多試試吧。 |
7樓2012-07-17 11:02:59
shenye.judy
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2樓2012-07-16 19:39:51
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3樓2012-07-16 19:56:31
4樓2012-07-16 20:03:57
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