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stewart3261銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
RT-PCR相關(guān)問題
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大神幫我！ 目前在做心臟組織的逆轉(zhuǎn)錄PCR。遇到的問題，首先用trizol提取總RNA，測(cè)其吸光度比值260/280在1.5左右，遠(yuǎn)大不到1.8-2.0。有人說是因?yàn)槲矣肈EC水稀釋做空白，用TE會(huì)好些，暫時(shí)還沒有實(shí)踐。比值小于1.8應(yīng)該是有蛋白污染吧？然后如果繼續(xù)做下面的逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增有什么影響呢？ 擴(kuò)增時(shí)問題，內(nèi)參表達(dá)不好（內(nèi)參為gapdh）。并且陰性對(duì)照管也有表達(dá)��？ct值在25到28左右！這個(gè)問題是不是很嚴(yán)重？ 大神指導(dǎo)一下吧！ 用的槍頭，EP管都是直接購(gòu)買的無酶的產(chǎn)品，有一段時(shí)間了。會(huì)不會(huì)應(yīng)經(jīng)被污染有RNA酶呢？ |
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