 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2472 | 回復(fù): 23 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MicEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
tzaixmc木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
細(xì)菌基因組文庫構(gòu)建的相關(guān)問題
|
|||
|
目前想要用質(zhì)粒pUCM-T建一個2-6kb的細(xì)菌基因組的質(zhì)粒文庫。實驗室沒人做過，啥也不懂，望高手出來解答一下。謝謝！ 1. 質(zhì)粒載體酶切后要先切膠回收，再用CIAP處理完后再用切膠回收嗎？ 2. 2-6kb的回收片段和末端磷酸化的載體連接時加入量多少比較合適？有人說按DNA載體和外源片斷以6:1的摩爾比，那要分別加多少夠做一次轉(zhuǎn)化？ 3. 如果我想建這個庫要8000的克隆，那我如果一次轉(zhuǎn)化只有500個怎么辦？是多做累積到8000個還是一次多做幾管連接轉(zhuǎn)化累計到8000個克��？ 4. 對構(gòu)建出來的文庫我想用池的方式保存。我想要提取里面的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化打另外一株菌中做活性檢測，那這個質(zhì)粒提取我是直接提取一個池的質(zhì)粒，還是從這個池里接種一點到新的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)起來再做轉(zhuǎn)化？ 望高手出來解答一下啊，非常感謝！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 微生物生態(tài)學(xué) | functional genomics |
» 猜你喜歡
一志愿大連理工大學(xué)材料求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料與化工調(diào)劑一志愿大連海事085600，349
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿中海洋320化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料科學(xué)與工程調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
311求調(diào)劑一志愿合肥工業(yè)大學(xué)
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿食品科學(xué)與工程083200求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料科學(xué)與工程求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
一志愿 南京航空航天大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 細(xì)菌的基因組在-20℃能放多久？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 細(xì)菌基因組DNA提取 交流
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 基因組文庫-----genomic library
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求助：基因組文庫構(gòu)建時一般用什么Marker？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】如何構(gòu)建細(xì)菌的基因組表達文庫
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】【求助】細(xì)菌未知功能基因的克隆方法
已經(jīng)有14人回復(fù)
tzaixmc
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時
- 蟲號: 977490
- 注冊: 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
9樓2012-07-25 08:33:00
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
tzaixmc: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2012-07-20 14:13:50
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:24
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
tzaixmc: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2012-07-20 14:13:50
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:24
|
1.載體質(zhì)粒你先切膠回收，之后CIAP，最后直接溶液回收就可以了。 2.關(guān)于連接體系，一般做10ul吧，黏性末端采用T4連接酶吧，我一般體現(xiàn)為：1ul 10Xbuffer，1ul 酶，0.5-1ul 載體，剩余的全加目的片段補足至10ul。10ul連接體系轉(zhuǎn)化一管，你的轉(zhuǎn)化效率有點低，我一般連接一管10ul能長幾千個吧。要是不夠的話，你就多連接幾管，多作幾個轉(zhuǎn)化。 3.關(guān)于池保存，你可以將池洗下來的菌，添加適量培養(yǎng)基搖勻（我一般搖5-8h，轉(zhuǎn)速高些）后取一些菌提質(zhì)粒，也可以按你說的，待洗下來菌液的搖勻后，轉(zhuǎn)接一些從新?lián)u菌提質(zhì)粒。  |
3樓2012-07-20 11:07:41
tzaixmc
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時
- 蟲號: 977490
- 注冊: 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
4樓2012-07-20 14:13:40
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:37
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-22 12:51:11
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-25 08:27:48
rainwander: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:37
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-22 12:51:11
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-25 08:27:48
|
載體和目的片段的濃度沒準(zhǔn)確測過，也就簡單跑了下核酸電泳。一般來說，目的片段與載體的摩爾比例在10:1比較合適。你的意思是，目的片段比載體多，連接不完全吧？，假設(shè)這樣說，10ng DNA就完全包含你的所有DNA多樣性了，連接時加1000ng DNA，是比載體多了很多，但是你的每個目的多樣性DNA就有100個參與連接，這樣你的覆蓋完整率就很高了。 |
5樓2012-07-20 15:47:03
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 生物考研337分求調(diào)劑 +3 | cgxin 2026-03-30 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 288資源與環(huán)境專碩求調(diào)劑，不限專業(yè)，有學(xué)上就行 +11 | lllllos 2026-03-30 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料357 +3 | 麥恩莉. 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范化學(xué)332分求調(diào)劑 +3 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +9 | hanamiko 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +5 | 朵朵- 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | @MZB382400 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +10 | 大饞小子 2026-03-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥調(diào)劑 +5 | Feisty。 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +6 | 愛羈絆 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 11408軟件工程求調(diào)劑 +3 | Qiu學(xué)ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京航空航天大學(xué)材料學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 315調(diào)劑 +4 | 0860求調(diào)劑 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)一志愿南京師范大學(xué)303求調(diào)劑 +3 | zzffylgg 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑總分293英一數(shù)二 +4 | 鋼鐵大炮 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京郵電大學(xué) 288分 材料考研 求調(diào)劑 +3 | jl0720 2026-03-26 | 3/150 |
|