 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2451 | 回復: 23 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MicEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
tzaixmc木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
細菌基因組文庫構(gòu)建的相關(guān)問題
|
|||
|
目前想要用質(zhì)粒pUCM-T建一個2-6kb的細菌基因組的質(zhì)粒文庫。實驗室沒人做過，啥也不懂，望高手出來解答一下。謝謝！ 1. 質(zhì)粒載體酶切后要先切膠回收，再用CIAP處理完后再用切膠回收嗎？ 2. 2-6kb的回收片段和末端磷酸化的載體連接時加入量多少比較合適？有人說按DNA載體和外源片斷以6:1的摩爾比，那要分別加多少夠做一次轉(zhuǎn)化？ 3. 如果我想建這個庫要8000的克隆，那我如果一次轉(zhuǎn)化只有500個怎么辦？是多做累積到8000個還是一次多做幾管連接轉(zhuǎn)化累計到8000個克�。� 4. 對構(gòu)建出來的文庫我想用池的方式保存。我想要提取里面的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化打另外一株菌中做活性檢測，那這個質(zhì)粒提取我是直接提取一個池的質(zhì)粒，還是從這個池里接種一點到新的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)起來再做轉(zhuǎn)化？ 望高手出來解答一下啊，非常感謝！ |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 微生物生態(tài)學 | functional genomics |
» 猜你喜歡
【考研調(diào)劑】化學專業(yè) 281分，一志愿四川大學，誠心求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復
-
一志愿華南師大 070300（化學）304分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
一志愿 西北大學 ，070300化學學碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。
已經(jīng)有3人回復
-
一志愿重慶大學085700資源與環(huán)境專碩，總分308求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
354求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
一志愿西南交大，求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
299求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
材料專業(yè)求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 細菌的基因組在-20℃能放多久？
已經(jīng)有7人回復
- 細菌基因組DNA提取 交流
已經(jīng)有18人回復
- 基因組文庫-----genomic library
已經(jīng)有11人回復
- 求助：基因組文庫構(gòu)建時一般用什么Marker？
已經(jīng)有12人回復
- 【求助/交流】如何構(gòu)建細菌的基因組表達文庫
已經(jīng)有19人回復
- 【求助/交流】【求助】細菌未知功能基因的克隆方法
已經(jīng)有14人回復
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應助: 28 (小學生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
tzaixmc: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2012-07-20 14:13:50
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:24
感謝參與，應助指數(shù) +1
tzaixmc: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2012-07-20 14:13:50
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:24
|
1.載體質(zhì)粒你先切膠回收，之后CIAP，最后直接溶液回收就可以了。 2.關(guān)于連接體系，一般做10ul吧，黏性末端采用T4連接酶吧，我一般體現(xiàn)為：1ul 10Xbuffer，1ul 酶，0.5-1ul 載體，剩余的全加目的片段補足至10ul。10ul連接體系轉(zhuǎn)化一管，你的轉(zhuǎn)化效率有點低，我一般連接一管10ul能長幾千個吧。要是不夠的話，你就多連接幾管，多作幾個轉(zhuǎn)化。 3.關(guān)于池保存，你可以將池洗下來的菌，添加適量培養(yǎng)基搖勻（我一般搖5-8h，轉(zhuǎn)速高些）后取一些菌提質(zhì)粒，也可以按你說的，待洗下來菌液的搖勻后，轉(zhuǎn)接一些從新?lián)u菌提質(zhì)粒。  |
3樓2012-07-20 11:07:41
tzaixmc
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時
- 蟲號: 977490
- 注冊: 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
2樓2012-07-20 08:02:13
tzaixmc
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時
- 蟲號: 977490
- 注冊: 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
4樓2012-07-20 14:13:40
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應助: 28 (小學生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:37
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-22 12:51:11
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-25 08:27:48
rainwander: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-07-20 20:54:37
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-22 12:51:11
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-25 08:27:48
|
載體和目的片段的濃度沒準確測過，也就簡單跑了下核酸電泳。一般來說，目的片段與載體的摩爾比例在10:1比較合適。你的意思是，目的片段比載體多，連接不完全吧？，假設這樣說，10ng DNA就完全包含你的所有DNA多樣性了，連接時加1000ng DNA，是比載體多了很多，但是你的每個目的多樣性DNA就有100個參與連接，這樣你的覆蓋完整率就很高了。 |
5樓2012-07-20 15:47:03
克隆大蝦
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應助: 133 (高中生)
- 金幣: 5985.9
- 散金: 236
- 紅花: 10
- 帖子: 2367
- 在線: 1337.3小時
- 蟲號: 93868
- 注冊: 2005-09-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
6樓2012-07-20 19:43:14
tzaixmc
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時
- 蟲號: 977490
- 注冊: 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
7樓2012-07-22 12:53:03
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應助: 28 (小學生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學
8樓2012-07-22 14:41:17
tzaixmc
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時
- 蟲號: 977490
- 注冊: 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
9樓2012-07-25 08:33:00
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應助: 28 (小學生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學
10樓2012-07-25 08:42:28
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 tzaixmc 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +5 | Tyoumou 2026-03-18 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +15 | 陌の森林 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學大學 ，080500材料科學與工程學碩，總分289分 +4 | @taotao 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 北科281學碩材料求調(diào)劑 +5 | tcxiaoxx 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0817 化學工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章 +22 | rare12345 2026-03-18 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +3 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料學碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[基金申請]
學校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學，生物學，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 320求調(diào)劑0856
+3
|
不想起名字112 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學 305求調(diào)劑 +4 | FY_yy 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +8 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
0854，計算機類招收調(diào)劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +11 | zjl的號 2026-03-16 | 16/800 |
|
|
|
[基金申請] 被我言中：新模板不強調(diào)格式了，假專家開始管格式了 +4 | beefly 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 太陽花天天開心 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學一志愿川大藥學327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|