 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2453 | 回復(fù): 23 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MicEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
tzaixmc木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
細(xì)菌基因組文庫(kù)構(gòu)建的相關(guān)問(wèn)題
|
|||
|
目前想要用質(zhì)粒pUCM-T建一個(gè)2-6kb的細(xì)菌基因組的質(zhì)粒文庫(kù)。實(shí)驗(yàn)室沒(méi)人做過(guò)，啥也不懂，望高手出來(lái)解答一下。謝謝！ 1. 質(zhì)粒載體酶切后要先切膠回收，再用CIAP處理完后再用切膠回收嗎？ 2. 2-6kb的回收片段和末端磷酸化的載體連接時(shí)加入量多少比較合適？有人說(shuō)按DNA載體和外源片斷以6:1的摩爾比，那要分別加多少夠做一次轉(zhuǎn)化？ 3. 如果我想建這個(gè)庫(kù)要8000的克隆，那我如果一次轉(zhuǎn)化只有500個(gè)怎么辦？是多做累積到8000個(gè)還是一次多做幾管連接轉(zhuǎn)化累計(jì)到8000個(gè)克��？ 4. 對(duì)構(gòu)建出來(lái)的文庫(kù)我想用池的方式保存。我想要提取里面的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化打另外一株菌中做活性檢測(cè)，那這個(gè)質(zhì)粒提取我是直接提取一個(gè)池的質(zhì)粒，還是從這個(gè)池里接種一點(diǎn)到新的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)起來(lái)再做轉(zhuǎn)化？ 望高手出來(lái)解答一下啊，非常感謝！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 微生物生態(tài)學(xué) | functional genomics |
» 猜你喜歡
278求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
297求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
0703化學(xué)297求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料學(xué)碩301分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
280求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
313求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
317求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 細(xì)菌的基因組在-20℃能放多久？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 細(xì)菌基因組DNA提取 交流
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 基因組文庫(kù)-----genomic library
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求助：基因組文庫(kù)構(gòu)建時(shí)一般用什么Marker？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】如何構(gòu)建細(xì)菌的基因組表達(dá)文庫(kù)
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】【求助】細(xì)菌未知功能基因的克隆方法
已經(jīng)有14人回復(fù)
jinpeng_6118
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1019189
- 注冊(cè): 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
tzaixmc: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2012-07-20 14:13:50
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵(lì)交流 2012-07-20 20:54:24
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
tzaixmc: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2012-07-20 14:13:50
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵(lì)交流 2012-07-20 20:54:24
|
1.載體質(zhì)粒你先切膠回收，之后CIAP，最后直接溶液回收就可以了。 2.關(guān)于連接體系，一般做10ul吧，黏性末端采用T4連接酶吧，我一般體現(xiàn)為：1ul 10Xbuffer，1ul 酶，0.5-1ul 載體，剩余的全加目的片段補(bǔ)足至10ul。10ul連接體系轉(zhuǎn)化一管，你的轉(zhuǎn)化效率有點(diǎn)低，我一般連接一管10ul能長(zhǎng)幾千個(gè)吧。要是不夠的話，你就多連接幾管，多作幾個(gè)轉(zhuǎn)化。 3.關(guān)于池保存，你可以將池洗下來(lái)的菌，添加適量培養(yǎng)基搖勻（我一般搖5-8h，轉(zhuǎn)速高些）后取一些菌提質(zhì)粒，也可以按你說(shuō)的，待洗下來(lái)菌液的搖勻后，轉(zhuǎn)接一些從新?lián)u菌提質(zhì)粒。  |
3樓2012-07-20 11:07:41
tzaixmc
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 977490
- 注冊(cè): 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
2樓2012-07-20 08:02:13
tzaixmc
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 977490
- 注冊(cè): 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
4樓2012-07-20 14:13:40
jinpeng_6118
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1019189
- 注冊(cè): 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-07-20 20:54:37
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-22 12:51:11
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-25 08:27:48
rainwander: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-07-20 20:54:37
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-22 12:51:11
tzaixmc: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-07-25 08:27:48
|
載體和目的片段的濃度沒(méi)準(zhǔn)確測(cè)過(guò)，也就簡(jiǎn)單跑了下核酸電泳。一般來(lái)說(shuō)，目的片段與載體的摩爾比例在10:1比較合適。你的意思是，目的片段比載體多，連接不完全吧？，假設(shè)這樣說(shuō)，10ng DNA就完全包含你的所有DNA多樣性了，連接時(shí)加1000ng DNA，是比載體多了很多，但是你的每個(gè)目的多樣性DNA就有100個(gè)參與連接，這樣你的覆蓋完整率就很高了。 |
5樓2012-07-20 15:47:03
克隆大蝦
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 133 (高中生)
- 金幣: 5990.9
- 散金: 236
- 紅花: 10
- 帖子: 2367
- 在線: 1337.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 93868
- 注冊(cè): 2005-09-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
6樓2012-07-20 19:43:14
tzaixmc
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 977490
- 注冊(cè): 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
7樓2012-07-22 12:53:03
jinpeng_6118
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1019189
- 注冊(cè): 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
8樓2012-07-22 14:41:17
tzaixmc
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 2991.1
- 紅花: 2
- 帖子: 830
- 在線: 197.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 977490
- 注冊(cè): 2010-03-21
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
9樓2012-07-25 08:33:00
jinpeng_6118
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1019189
- 注冊(cè): 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
10樓2012-07-25 08:42:28
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 tzaixmc 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +9 | 申子申申 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料 271求調(diào)劑 +5 | 展信悅_ 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求助 +4 | 夢(mèng)里的無(wú)言 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求 B區(qū) 調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +6 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料 336 求調(diào)劑 +3 | An@. 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +9 | Doleres 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +4 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +6 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)家禽遺傳育種課題組2026年碩士招生（接收計(jì)算機(jī)專業(yè)調(diào)劑） +3 | 123阿標(biāo) 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +3 | 八6八68 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專碩有科研經(jīng)歷三項(xiàng)國(guó)獎(jiǎng)兩個(gè)實(shí)用型專利一項(xiàng)省級(jí)立項(xiàng) +6 | 大火山小火山 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|