 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 23276 | 回復: 4 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
cexoihtydx金蟲 (正式寫手)
|
[求助]
求嘌呤霉素篩選穩(wěn)轉細胞株的詳細步驟
|
|
|
欲使用嘌呤霉素抗性篩選細胞穩(wěn)轉細胞株，求 1. 確定細胞最適的嘌呤霉素濃度范圍的實驗步驟 2. 做轉染時的嘌呤霉素篩選步驟 新手，非常感謝！ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有91人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
5樓2018-04-20 09:30:15
肖穎2009
鐵蟲 (正式寫手)
- 應助: 36 (小學生)
- 金幣: 1068.4
- 散金: 35
- 紅花: 8
- 帖子: 665
- 在線: 147.7小時
- 蟲號: 945732
- 注冊: 2010-01-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
|
哺乳動物細胞 嘌呤霉素在哺乳動物細胞系反應中的有效濃度范圍從1-10μg/ml。實驗初始，我們建議， 決定實驗中抗生素的最適濃度的方法是首先該濃度可以殺死自身宿主細胞系。 嘌呤霉素可以迅速消滅不含有pac基因的真核細胞。死亡細胞從平板分離，該平板可以用于簡單和初期的轉化克隆細胞鑒定。建議篩選哺乳動物細胞的最適濃度應當低于所列濃度值。 哺乳動物細胞篩選方法 嘌呤霉素常用濃度范圍在1 - 10 μg/ml。等轉化出含有pac基因的質粒后，細胞在含有嘌呤霉 素的普通培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉染子。 1. 在轉染的48小時內，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 注意：細胞在快速增殖時，抗生素作用最明顯。如果細胞濃度過大，抗生素產生的效力也會下 降。細胞最好在他們融合率不高于25%時分裂最佳。 2.每隔3-4天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。 3.篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿 主細胞系和轉染篩選效率。 4.轉移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。這次 富集培養(yǎng)是為日后的細胞毒性實驗做準備。 |
3樓2013-02-06 14:29:54
|
抗生素篩選穩(wěn)定細胞株流程 1. 提前一天接種細胞與24孔板中，待第二天長成25%單層為宜，二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃過夜培養(yǎng)； 2. 第二天將培養(yǎng)液換成含抗生素的培養(yǎng)基，抗生素濃度按梯度遞增； 3. 培養(yǎng)7-10天左右絕大多數細胞死亡抗生素濃度為準，篩選細胞時刻適當提高濃度； 4. 二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)72h后按照1:10的比例將轉染細胞傳代，使用預實驗得到的抗生素濃度的培養(yǎng)基培養(yǎng)。后挑選單克隆，有限稀釋法挑取單克隆。 5. Western blot或ELISA檢測蛋白的表達情況，挑取多個單克隆進行表達檢測，篩選出表達量最高的克隆傳代并保存。最終進行穩(wěn)轉株篩選 |
4樓2018-04-20 09:24:17
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 廣西大學材料導師推薦 +3 | 夏夏夏小正 2026-03-17 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化學調劑 +5 | yzysaa 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +4 | 要好好無聊 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
[考研] 317求調劑 +9 | 申子申申 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 306求0703調劑一志愿華中師范 +5 | 紙魚ly 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調劑 +3 | 鳳凰院丁真 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 初始318分求調劑（有工作經驗） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 332求調劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學-071000生物學-293分-求調劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0817 化學工程 299分求調劑 有科研經歷 有二區(qū)文章 +22 | rare12345 2026-03-18 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 353求調劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調劑，科研經歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 08工學調劑 +5 | 用戶573181 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學碩318求調劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調劑，一志愿華南理工大學071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調劑 +6 | lemonzzn 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 312求調劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|