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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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yan_cx

木蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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蟲號: 1096989
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性別: MM
專業(yè): 藥物分析

[求助] 關(guān)于細胞活力測定LDH

我要做細胞活力測定的LDH，看文獻一般是測LDH的釋放率，即上清中釋放出的LDH除以總的LDH，但是不知總的LDH 怎么測定?
單純測上清中的LDH是否可以，能否說明問題？
先謝謝了~~

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1樓 2012-08-09 10:28:34

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陳銳鴻

銀蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 原發(fā)性腎臟疾病

★
xiaoxiao270: 金幣+1, 3Q 2014-08-04 11:53:55

乳酸脫氫酶(LDH)釋放實驗
（1） HK-2細胞以2x105/孔濃度接種于24孔板；
（2）實驗前換無血清DMEM/F12培養(yǎng)液孵育24 h，使細胞同步于靜止期；
（3）當HK-2細胞生長至65%～75%融合時，棄上清液，加入含不同濃度AA（ 0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml）的無血清DMEM/F12培養(yǎng)液0.5ml；
（4）孵育細胞48 h后，吸取培養(yǎng)上清入1.5ml Ep管中待測；
（5）用冷PBS液清洗細胞2～3次，將冷2%TritonX-100 0.5 ml加入各孔中，反復(fù)凍融吹打3次使細胞充分破裂溶解；
（6）吸取細胞裂解液入1.5ml Ep管中12000g（相當于12300ref）離心3min。取上清入另一1.5ml Ep管中。應(yīng)用全自動生化分析儀檢測該上清液LDH值（即細胞內(nèi)的LDH值）和上述培養(yǎng)上清液中的LDH值；
（7）計算各組LDH釋放率： LDH釋放率(%)＝上清液LDH值x 100/（細胞內(nèi)LDH值十上清液LDH值）。
我知道就這么多了，，如果你有更具體的麻煩你告知一下我

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2樓2014-08-04 01:08:11