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[求助]
關(guān)于細(xì)胞活力測定LDH
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我要做細(xì)胞活力測定的LDH，看文獻(xiàn)一般是測LDH的釋放率，即上清中釋放出的LDH除以總的LDH，但是不知總的LDH 怎么測定? 單純測上清中的LDH是否可以，能否說明問題？ 先謝謝了~~ |
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xiaoxiao270: 金幣+1, 3Q 2014-08-04 11:53:55
xiaoxiao270: 金幣+1, 3Q 2014-08-04 11:53:55
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乳酸脫氫酶(LDH)釋放實(shí)驗(yàn) （1） HK-2細(xì)胞以2x105/孔濃度接種于24孔板； （2） 實(shí)驗(yàn)前換無血清DMEM/F12培養(yǎng)液孵育24 h，使細(xì)胞同步于靜止期； （3） 當(dāng)HK-2細(xì)胞生長至65%～75%融合時(shí)，棄上清液，加入含不同濃度AA（ 0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml）的無血清DMEM/F12培養(yǎng)液0.5ml； （4） 孵育細(xì)胞48 h后，吸取培養(yǎng)上清入1.5ml Ep管中待測； （5） 用冷PBS液清洗細(xì)胞2～3次，將冷2%TritonX-100 0.5 ml加入各孔中，反復(fù)凍融吹打3次使細(xì)胞充分破裂溶解； （6） 吸取細(xì)胞裂解液入1.5ml Ep管中12000g（相當(dāng)于12300ref）離心3min。取上清入另一1.5ml Ep管中。應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測該上清液LDH值（即細(xì)胞內(nèi)的LDH值）和上述培養(yǎng)上清液中的LDH值； （7） 計(jì)算各組LDH釋放率： LDH釋放率(%)＝上清液LDH值x 100/（細(xì)胞內(nèi)LDH值十上清液LDH值）。 我知道就這么多了，，如果你有更具體的麻煩你告知一下我 |
2樓2014-08-04 01:08:11
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