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[求助]
RT-PCR沒有出現(xiàn)內(nèi)參基因的條帶和目的條帶，請問是什么原因？
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| 最近在做RT-PCR，兩步法的。結(jié)果RNA的質(zhì)量還是可以，三條帶明顯，5s比較淺，但是沒有目的條帶和內(nèi)參的基因的出現(xiàn)，pcr用的是Taq酶，擴增的片段是350bp，280bp，360bp，三種基因條帶，結(jié)果沒有出現(xiàn)任何帶，用1.8%瓊脂糖凝膠電泳。我想向大家請教一下是不是用的Taq酶保真性不高所致？還是模板質(zhì)量還是不高？還是用瓊脂糖電泳跑小片段不合適，用聚丙烯酰胺比較合適呢？？？ |
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3樓2012-08-10 09:58:00
wtyyyyy1988
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2樓2012-08-09 20:48:45
chenguestc
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你的PCR產(chǎn)物跟瓊脂糖濃度無關(guān)，不論哪個濃度，至少應(yīng)該有帶或許帶是SMEAR不是非常SHARP. 原因1，反轉(zhuǎn)錄過程出了問題，2，PCR組分出了問題。 如果是1，請重新做反轉(zhuǎn)錄。如果是2，請把所有PCR組分全部換成新的。 建議您，先把PCR所有組分換成新的之后看結(jié)果再確定。如果換了全新的組分仍然擴增不出來，就只有重新做反轉(zhuǎn)錄。因為你的內(nèi)參也沒擴增出來，排除引物的問題。 |
4樓2012-08-10 12:25:42
linqin1029
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5樓2012-08-10 12:54:07
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