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有關(guān)RT-PCR，請教有經(jīng)驗(yàn)的蟲友！先謝了！
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小弟，現(xiàn)在想做RT-PCR，需要提取癌細(xì)胞總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進(jìn)行Real time PCR定量分析。 1、請問，用哪家公司的試劑盒比較好，包括提RNA、cDNA合成、Real time PCR所用的試劑盒。 2、在用試劑盒提取RNA之前，需要對細(xì)胞做怎樣的處理？比如，是否需要裂解細(xì)胞？若需要，用什么試劑，該怎么做？ 小弟試驗(yàn)比較著急，多謝諸位戰(zhàn)友了！ |
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chlorella409
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3樓2012-08-10 14:09:04
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4樓2012-08-10 15:02:23
【答案】應(yīng)助回帖
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| 用trizol試劑提取總RNA，在逆轉(zhuǎn)錄，然后進(jìn)行RT-PCR，如果做絕對定量PCR的話，可將cDNA10倍梯度稀釋，設(shè)置陰性，陽性對照。還要有內(nèi)參基因做標(biāo)準(zhǔn)CT-DNA質(zhì)量曲線，通過樣品的CT值就可以知道該基因的表達(dá)情況了。不知道這個符不符合你的情況，呵呵。。。。 |
5樓2012-08-10 15:39:58
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