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飄零的葉子

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[交流] SDS-PAGE中上樣緩沖液中加入DTT是什么作用

如題，哪位大俠能給解釋下上樣緩沖液中DTT的作用啊，加與不加DTT在SDS-PAGE中有什么區(qū)別？！

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1樓 2012-08-13 17:03:28

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yingyangyang

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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-08-14 13:41:36

DTT是二硫蘇糖醇，是一種強(qiáng)還原劑，作用類(lèi)似于巰基乙醇。但是毒性比巰基乙醇低，但是價(jià)格貴。主要作用是防止DNA二聚化！

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2樓2012-08-13 17:15:19

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lou87

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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-08-14 13:41:47

是一種強(qiáng)還原劑，能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂，而sds可以破壞蛋白質(zhì)的二三級(jí)結(jié)構(gòu)，二者使蛋白質(zhì)呈線性，忽略電荷因素，其遷移率可看成與分子大小成正比。如果未加DTT，則蛋白質(zhì)的線性多肽鏈未完全打開(kāi)，其分子空間結(jié)構(gòu)也會(huì)影響遷移率。

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3樓2012-08-13 17:52:47

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飄零的葉子

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3樓: Originally posted by lou87 at 2012-08-13 17:52:47
是一種強(qiáng)還原劑，能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂，而sds可以破壞蛋白質(zhì)的二三級(jí)結(jié)構(gòu)，二者使蛋白質(zhì)呈線性，忽略電荷因素，其遷移率可看成與分子大小成正比。如果未加DTT，則蛋白質(zhì)的線性多肽鏈未完全打開(kāi)，其分子空間 ...

請(qǐng)問(wèn)您有做過(guò)上樣緩沖液中不加DTT的SDS-PAGE么？影響很大嗎？

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4樓2012-08-13 19:36:57

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scutphoenix

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很大，之前做個(gè)PDGF，一種二聚體蛋白，加了就是單體，不加就是二聚體，大小很明顯呀

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5樓2012-08-13 21:58:02

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dongniaoxin

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加DTT就是做還原電泳，可以打開(kāi)蛋白中的二硫鍵；不加DTT的是非還原電泳，蛋白中若是有二聚體、多聚體就會(huì)顯現(xiàn)出來(lái)

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6樓2012-08-15 08:35:41

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sl35537417

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打開(kāi)蛋白中的二硫鍵

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8樓2012-08-15 09:10:44

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joan198108

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感覺(jué)這跟你的蛋白組成有關(guān)，如果不含半胱氨酸可能影響較小

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9樓2012-08-16 09:33:48

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4樓: Originally posted by 飄零的葉子 at 2012-08-13 19:36:57
請(qǐng)問(wèn)您有做過(guò)上樣緩沖液中不加DTT的SDS-PAGE么？影響很大嗎？...

沒(méi)有做過(guò)，都加了的。個(gè)人認(rèn)為影響大小取決于你的蛋白樣中具體所含二硫鍵多少，越多影響越大。

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10樓2012-10-07 21:18:20

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飄零的葉子

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6樓: Originally posted by dongniaoxin at 2012-08-15 08:35:41
加DTT就是做還原電泳，可以打開(kāi)蛋白中的二硫鍵；不加DTT的是非還原電泳，蛋白中若是有二聚體、多聚體就會(huì)顯現(xiàn)出來(lái)

哦，知道了，謝謝

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7樓2012-08-15 08:58:57

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nangyingyuan

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個(gè)人認(rèn)為影響大小取決于你的蛋白樣中具體所含二硫鍵多少，越多影響越大。

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11樓2012-12-18 14:23:49

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