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yxperfect

新蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 14kd的蛋白，做westernblot，電轉(zhuǎn)條件是怎樣的

小分子量蛋白，14kd，1.5mm的膠
電轉(zhuǎn)條件：250mA，濕轉(zhuǎn)，3h30min。
結(jié)果只能看到最小分子量26kd的預(yù)染Marker，其他大分子量的marker還是看得很清晰的。
是不是轉(zhuǎn)過(guò)了啊，，，怎么調(diào)整條件，膠有點(diǎn)厚。

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1樓 2012-08-14 17:00:42

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廢哥117

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
yqbter: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖！ 2012-09-01 21:07:16

14KD，用15%的膠，你的轉(zhuǎn)膜條件沒(méi)問(wèn)題，濕轉(zhuǎn)不存在轉(zhuǎn)過(guò)的問(wèn)題，如果只能看到20KD的條帶，那可能是你電泳跑過(guò)了，像這種小分子量的蛋白，要注意電泳的條件和時(shí)間

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不斷提高自己

7樓2012-09-01 16:55:08

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yxperfect

新蟲(chóng) (初入文壇)

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wizardfan: 金幣+1, 要平時(shí)多發(fā)帖交流，別臨時(shí)抱佛腳的來(lái)求助。 2012-09-02 07:39:34

做完sds-page，預(yù)染Marker的條帶都能看到的，包括，11,17兩條。。樣品的量不多了，所以不能摸條件了。。各位大仙，求經(jīng)驗(yàn)了~~~~

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2樓2012-08-14 17:04:15

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小韓韓

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【答案】應(yīng)助回帖

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yqbter: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖！ 2012-08-31 19:32:27

配制15%的膠或梯度膠，1.0mm就行，轉(zhuǎn)印時(shí)用濕轉(zhuǎn)60V恒壓，一直轉(zhuǎn)兩個(gè)小時(shí)。注意轉(zhuǎn)的過(guò)程中電流不要高于180mA。

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3樓2012-08-31 09:33:20

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遙控器68

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yqbter: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖！ 2012-08-31 19:32:42

200mA 應(yīng)該也沒(méi)問(wèn)題，一直這樣效果也挺不錯(cuò)的

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4樓2012-08-31 10:04:02

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