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sherrysure銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
對(duì)于一個(gè)沒(méi)有內(nèi)含子的基因，請(qǐng)問(wèn)用基因組或cDNA作為模板跑PCR對(duì)于結(jié)果有什么影響嗎？
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請(qǐng)問(wèn)大家， 對(duì)于一個(gè)沒(méi)有內(nèi)含子的基因，用基因組或cDNA作為模板跑PCR對(duì)于結(jié)果有什么影響嗎？ 我在擴(kuò)一個(gè)基因，用公布的mRNA序列設(shè)計(jì)的引物，文獻(xiàn)上都是用反轉(zhuǎn)錄后的cDNA跑的PCR，但是我將這一序列到我所做的生物基因組中比對(duì)后發(fā)現(xiàn)其沒(méi)有內(nèi)含子，所以我就用它的基因組試著跑PCR，可是沒(méi)有條帶，不知道是什么原因。 還希望高手不吝賜教。 另外還想請(qǐng)問(wèn)一下： 跑PCR的時(shí)候，什么時(shí)候用rTaq酶，什么時(shí)候用LA Taq酶？ 兩者PCR對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)又影響嗎？ 萬(wàn)分感激！ |
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| 基因與mRNA反轉(zhuǎn)錄到的DNA是不一樣的，基因即使沒(méi)有內(nèi)含子，也會(huì)有基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控序列等，要比mRNA反轉(zhuǎn)錄得到的序列長(zhǎng)，此外，初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物還可能會(huì)被間接修飾等。所以不能用基因序列代替cDNA。 |
sherrysure
2樓2012-08-16 17:45:56
sherrysure
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3樓2012-08-21 09:01:12
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6樓2012-08-21 17:22:11
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7樓2012-08-21 17:25:34
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8樓2012-08-21 22:05:39
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，七夕快樂(lè) 2012-08-23 15:47:52
小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，七夕快樂(lè) 2012-08-23 15:47:52
| 模板、引物、體系都試探過(guò)，但沒(méi)擴(kuò)出來(lái)。那就有點(diǎn)復(fù)雜了。（擴(kuò)了以前擴(kuò)出來(lái)過(guò)的基因成功過(guò)，并不代表模板一點(diǎn)問(wèn)題也沒(méi)有。是不是擴(kuò)出來(lái)的基因片段要比沒(méi)擴(kuò)出來(lái)的小？如果真是這樣，不過(guò)個(gè)人認(rèn)為模板的問(wèn)題大一些。） |
9樓2012-08-23 09:17:49
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10樓2012-08-23 09:39:29
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