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sherrysure銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
對于一個沒有內(nèi)含子的基因，請問用基因組或cDNA作為模板跑PCR對于結(jié)果有什么影響嗎？
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請問大家， 對于一個沒有內(nèi)含子的基因，用基因組或cDNA作為模板跑PCR對于結(jié)果有什么影響嗎？ 我在擴一個基因，用公布的mRNA序列設(shè)計的引物，文獻上都是用反轉(zhuǎn)錄后的cDNA跑的PCR，但是我將這一序列到我所做的生物基因組中比對后發(fā)現(xiàn)其沒有內(nèi)含子，所以我就用它的基因組試著跑PCR，可是沒有條帶，不知道是什么原因。 還希望高手不吝賜教。 另外還想請問一下： 跑PCR的時候，什么時候用rTaq酶，什么時候用LA Taq酶？ 兩者PCR對后續(xù)實驗又影響嗎？ 萬分感激！ |
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liuwt2008
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4樓2012-08-21 09:32:58
【答案】應(yīng)助回帖
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| 基因與mRNA反轉(zhuǎn)錄到的DNA是不一樣的，基因即使沒有內(nèi)含子，也會有基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控序列等，要比mRNA反轉(zhuǎn)錄得到的序列長，此外，初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物還可能會被間接修飾等。所以不能用基因序列代替cDNA。 |
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sherrysure
2樓2012-08-16 17:45:56
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3樓2012-08-21 09:01:12
sherrysure
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5樓2012-08-21 13:10:04
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