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lentinula

鐵蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)

[求助] 菌絲總蛋白提取方法已有1人參與

酚抽提法和TCA-丙酮沉淀法提取菌絲總蛋白質(zhì)，哪個(gè)更合適一些？或者有其他更好的辦法？謝謝~~
我是第一次提取胞內(nèi)總蛋白質(zhì)，用于單向電泳，請蟲哥蟲姐們多多指教啊啊啊。

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1樓 2012-08-17 10:37:36

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在下狒狒

新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 環(huán)境變化與預(yù)測

【答案】應(yīng)助回帖

我做過類似的，真菌菌絲提取總蛋白質(zhì)，我的方法如下：
1，菌絲過0.22um的膜，分離培養(yǎng)液和菌絲，完成可以稱量菌絲鮮重；
2，過濾后的菌絲凍干處理24h，得到菌絲干物質(zhì)；
3，得到的干物質(zhì)在冰上用預(yù)冷的組織研磨器處理，加入少量buffer，可以使研磨更為徹底。
4，所得到的總蛋白提取液6000g離心，即為總蛋白；
之前使用酚抽法，存在蛋白丟失的問題，TCA沒有做。后來我都是直接把提取液凍干濃縮到需要的濃度然后直接上樣，跑出來污染也不似很明顯。

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回復(fù)此樓

2樓2015-02-06 16:01:23

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