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請(qǐng)教PCR高手，使用SYBR Green I法進(jìn)行熒光定量PCR對(duì)于產(chǎn)物大小有什么要求？ 已有3人參與
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| 本人打算做熒光定量PCR，現(xiàn)在做了普通的rt-pcr，三種基因的大小為352bp，362bp，228bp，結(jié)果都擴(kuò)增出來了，下一步打算做熒光定量RT-PCR，熒光染料為SYBR，請(qǐng)問是不是可以接著使用普通Rt-PCR中所使用的引物呢，還是重新設(shè)計(jì)引物，使其產(chǎn)物大小在50-150bp之間？？？求解答？？ |
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2樓2012-08-22 13:25:33
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3樓2012-08-22 14:31:18
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助，七夕快樂 2012-08-23 15:55:31
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228可以試試。 我做過80-400bp的，200多點(diǎn)有的引物還是可以的，但是片段太長(zhǎng)PCR效率就有點(diǎn)低，并且有非特異PEAK, 我一般用60度退火，但是提高溫度到65度，可以減少或者消除非特異PEAK. 具體條件不能完全根據(jù)報(bào)道，具體情況具體分析，不過個(gè)人覺得，100-200左右的就很好。如果你的228效果不好，可以試試重新設(shè)計(jì)引物把目標(biāo)片段定于150bp左右。 |
4樓2012-08-22 20:18:01
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5樓2012-08-22 20:20:35
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