 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2007 | 回復(fù): 6 | |||
[求助]
特異性Promoter引物該怎么設(shè)計(jì)啊
|
|
小弟想請(qǐng)教各位高賢大仙一個(gè)關(guān)于Promoter引物設(shè)計(jì)的問(wèn)題。 我想把在某一種細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的Promoter擴(kuò)增出來(lái)，然后連接在適當(dāng)?shù)妮d體上并加上標(biāo)記蛋白和熒光蛋白的表達(dá)序列，使這些目的蛋白依據(jù)Promoter的特異性表達(dá)在這種細(xì)胞中。但是小弟之前沒(méi)有做過(guò)Promoter引物的設(shè)計(jì)，據(jù)說(shuō)涉及到5‘UTR端的長(zhǎng)度等問(wèn)題，希望各路高人指點(diǎn)一二，不勝感激。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有77人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 大家做RT-qPCR設(shè)計(jì)引物用的什么軟件呀？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 引物設(shè)計(jì)好了怎么檢測(cè)它的特異性
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 引物設(shè)計(jì)的問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】怎樣設(shè)計(jì)目的基因的引物
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】（引物設(shè)計(jì)）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影響目的基因的表達(dá)？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】求助：如何設(shè)計(jì)種屬特異性引物？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 引物設(shè)計(jì)時(shí)總是發(fā)生嚴(yán)重錯(cuò)配怎么辦？敬請(qǐng)大家指點(diǎn)！
已經(jīng)有3人回復(fù)
tiani_tan
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 30 (小學(xué)生)
- 金幣: 1251.7
- 散金: 5
- 紅花: 3
- 帖子: 266
- 在線: 139小時(shí)
- 蟲號(hào): 803661
- 注冊(cè): 2009-07-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 蔬菜學(xué)與瓜果學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 七夕這么有空，積極鼓勵(lì) 2012-08-23 15:52:30
張虎: 金幣+5, ★有幫助 2012-08-24 09:35:05
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 七夕這么有空，積極鼓勵(lì) 2012-08-23 15:52:30
張虎: 金幣+5, ★有幫助 2012-08-24 09:35:05
| 啟動(dòng)子的擴(kuò)增，模板是基因組DNA，需要將基因組DNA酶切后連上接頭，以一個(gè)接頭的序列為引物，目的基因內(nèi)部序列為另一側(cè)的引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，有點(diǎn)類似于RACE，你可以參考一下文獻(xiàn)，或者購(gòu)買相關(guān)的試劑盒��！祝好運(yùn)！ |
2樓2012-08-23 12:26:59
3樓2012-08-23 13:07:56
tiani_tan
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 30 (小學(xué)生)
- 金幣: 1251.7
- 散金: 5
- 紅花: 3
- 帖子: 266
- 在線: 139小時(shí)
- 蟲號(hào): 803661
- 注冊(cè): 2009-07-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 蔬菜學(xué)與瓜果學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
張虎: 金幣+15, ★★★★★最佳答案 2012-08-24 09:35:55
張虎: 金幣+15, ★★★★★最佳答案 2012-08-24 09:35:55
|
首先，確定你的物種是否已經(jīng)被報(bào)道，如果基因組已經(jīng)知道的話，那么根據(jù)網(wǎng)上的序列設(shè)計(jì)引物，這里需要注意的是分析啟動(dòng)子最低片段是多少；含有順式作用原件的區(qū)域有多長(zhǎng)；含有增強(qiáng)子的序列有多少，可能最后需要獲得幾條大小不同的片段，需要構(gòu)建幾個(gè)載體，一一驗(yàn)證。 對(duì)于基因組未曾報(bào)道的序列，就比較復(fù)雜。就像我上文說(shuō)的，需要用一些限制性內(nèi)切酶將基因組酶切成小片段后，連接接頭，然后利用接頭上的一直序列和基因內(nèi)部序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行啟動(dòng)子預(yù)測(cè)，然后擴(kuò)增含有不同區(qū)域的引物，驗(yàn)證功能。 建議還是搜集一下相關(guān)文獻(xiàn)，我只是看過(guò)文獻(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室有人做過(guò)這方面的。但我自己沒(méi)有做過(guò)。呵呵��！ |
4樓2012-08-24 09:05:24
|
你好，多謝你的回答。 我在文獻(xiàn)上查到某個(gè)基因的promoter時(shí)這么說(shuō)“Reporter gene assay: [str-1::gfp] translational fusion, with 4 kb 5'UTR of str-1 and the first 4 amino acids of the protein.” 請(qǐng)問(wèn)4kb 5'UTR of str-1 是從str-1 的5' CDS區(qū)起始密碼子往前算4kb（就是包括了5'UTR ），還是從 5'UTR之前往前算4kb（就是不包括5'UTR ）？還有，那個(gè)“the first 4 amino acids of the protein”怎么解釋？ 非常感謝！ |
5樓2012-08-24 10:25:49
tiani_tan
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 30 (小學(xué)生)
- 金幣: 1251.7
- 散金: 5
- 紅花: 3
- 帖子: 266
- 在線: 139小時(shí)
- 蟲號(hào): 803661
- 注冊(cè): 2009-07-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 蔬菜學(xué)與瓜果學(xué)
張虎6樓2012-08-24 11:51:46
7樓2012-08-24 12:00:25
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 張虎 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +3 | 簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-17 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[基金申請(qǐng)] 被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專家開(kāi)始管格式了 +4 | beefly 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +7 | zjl的號(hào) 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料專碩326求調(diào)劑 +6 | 墨煜姒莘 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +5 | 時(shí)間點(diǎn) 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0854控制工程 359求調(diào)劑 可跨專業(yè) +3 | 626776879 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑（0703有機(jī)化學(xué) +5 | ZY-05 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
有必要更換申報(bào)口嗎
 20+3
|
fannyamoy 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 337一志愿華南理工0805材料求調(diào)劑 +7 | mysdl 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 7712b 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +3 | miaodesi 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 18880831720 2026-03-11 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑，材料、化工皆可 +8 | 蘇打水7777 2026-03-11 | 10/500 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|