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[求助]
RT-PCR模板問題。
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| 我是準(zhǔn)備設(shè)計簡并引物擴(kuò)增一個魚類的未知基因的保守區(qū)。一些文獻(xiàn)上是提取腦部總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄得到第一鏈CDNA,然后用這CDNA做模板擴(kuò)增保守區(qū)。但是我老師的想法是直接提取DNA，然后用DNA做模板來擴(kuò)增保守區(qū)。請問有經(jīng)驗(yàn)的同學(xué)老師，這樣可行否？各自的有缺點(diǎn)是什么？請不吝賜教。 |
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mgangle
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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4樓2012-08-24 18:11:01
mgangle
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 在高等動植物中，DNA和RNA的區(qū)別在于，DNA是全基因序列含有內(nèi)含子和外顯子其擴(kuò)增得到的序列不能有完整的ORF框架，RNA只含有外顯子是一個完整的ORF框架。如果本實(shí)驗(yàn)的目的是先通過DNA擴(kuò)增獲得部分序列，然后通過DNA序列設(shè)計特異引物以cDNA為模板擴(kuò)增目的基因是可行的，但是如果想直接從DNA序列里獲得目的基因的mRNA序列這個肯定是不行的！因?yàn)槟悴豢赡苤苯訌腄NA序列中分析哪部分是外顯子那部分是內(nèi)含子。 |
2樓2012-08-24 16:32:06
3樓2012-08-24 17:03:52
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