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漫天流螢新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于大腸桿菌轉(zhuǎn)化
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| 本人使用的是電轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)進(jìn)去的質(zhì)粒帶有卡那霉素抗性，轉(zhuǎn)完以后用含100mg/L的卡納LB板涂勻，長(zhǎng)出菌落后，挑單菌落做菌落PCR，為神馬顯示不出陽(yáng)性？ |
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hyacinth326
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-08-29 16:27:53
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-08-29 16:27:53
| 我明白樓主的意思，因?yàn)殡娹D(zhuǎn)化考慮到連接體系離子濃度的問(wèn)題，一般都是先連接好了驗(yàn)證成功提質(zhì)粒再電轉(zhuǎn)化，我建議考慮一下抗生素的問(wèn)題，有時(shí)候電轉(zhuǎn)之后細(xì)菌耐受抗生素的濃度會(huì)升高，具體什么原因我不太清楚，但是我遇到過(guò)這種情況。還有一個(gè)可能是菌落pcr體系的問(wèn)題，有時(shí)候pcr驗(yàn)證可能不準(zhǔn)確，既然是大腸桿菌的話，提質(zhì)粒酶切一下看看也行啊 |
8樓2012-08-29 11:43:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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9樓2012-08-29 16:42:22
2樓2012-08-28 22:04:12
漫天流螢
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3樓2012-08-28 22:05:02
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漫天流螢
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6樓2012-08-29 10:45:29
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7樓2012-08-29 10:46:44
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