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皇馬鐵衛(wèi)

銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[交流] 酵母轉(zhuǎn)化假陽(yáng)性

最近在做畢赤酵母電轉(zhuǎn)。轉(zhuǎn)的是PCR片段，1.7kb，帶G418抗性基因。做了很多次，藥物板上長(zhǎng)了很多，轉(zhuǎn)涂在新的藥物板上仍然可以長(zhǎng)，但是提基因組做PCR就是沒(méi)有。陰性對(duì)照的板子上沒(méi)長(zhǎng)。

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1樓 2012-08-30 10:58:39

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wujunchina2002

木蟲(chóng) (初入文壇)

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皇馬鐵衛(wèi): 金幣+3 2012-08-31 18:04:36
皇馬鐵衛(wèi): 回帖置頂 2012-08-31 18:04:37

我以前做酵母轉(zhuǎn)化也遇到過(guò)和你一模一樣的情況。用G418做就是這個(gè)樣子。那時(shí)差不多200個(gè)克隆中才有一個(gè)是陽(yáng)性的，其他全是假陽(yáng)性。后來(lái)?yè)Q用zeocin抗生素就好了，沒(méi)有假陽(yáng)性問(wèn)題。我也試圖尋找過(guò)用G418時(shí)消除假陽(yáng)性的辦法，比如提高抗生素濃度等，但是根本沒(méi)有用。

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12樓2012-08-31 11:24:15

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piaoyunokok

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皇馬鐵衛(wèi): 金幣+1 2012-08-30 16:47:08

會(huì)不會(huì)是你的G418失效了呀?你添加的濃度是多大呢？

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2樓2012-08-30 11:11:49

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皇馬鐵衛(wèi)

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引用回帖:

2樓: Originally posted by piaoyunokok at 2012-08-30 11:11:49
會(huì)不會(huì)是你的G418失效了呀?你添加的濃度是多大呢？

我已經(jīng)加到300μg/ml。陰性的是沒(méi)有長(zhǎng)啊

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3樓2012-08-30 11:37:37

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gwd0312

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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皇馬鐵衛(wèi): 金幣+2, 這個(gè)有可能 2012-08-31 09:12:44

可能是你提取方法有問(wèn)題，或者你提取的基因組DNA 濃度過(guò)大導(dǎo)致P不出來(lái)，最后一種可能就是你的PCR程序有問(wèn)題！

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4樓2012-08-30 11:47:30

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