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萌主李萌萌銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
提取艾美爾球蟲(chóng)DNA的方法
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我是按照師姐提取東北虎源球蟲(chóng)DNA的的方法來(lái)提取艾美爾球蟲(chóng)的DNA的，可一直P(pán)不出來(lái)，各位蟲(chóng)友幫忙看看這個(gè)過(guò)程里有什么細(xì)節(jié)需要補(bǔ)充的么？特別是我標(biāo)紅的。我是第一次做，沒(méi)人指導(dǎo)啊~ ①將保存的卵囊液一80℃一室溫反復(fù)凍融三次后(一80℃、室溫每次各20min)，加入485μ裂解液TES，15μ(20mg/ml)蛋白酶K37℃消化過(guò)夜。 ②用酚、氯仿抽提，即加入500μ酚混勻（可以用漩渦振蕩器么？）靜置10min，12000r/min離心15min。 ③取上清，再加入酚一氯仿各250μ，（這里不加異戊醇也可以么？）12000r/min離心15min，最后加入500μ氯仿，12000r離心15min，取上清。 ④沉降（沉降多長(zhǎng)時(shí)間？），加入無(wú)水乙醇iml，一20℃沉降20min后，12000r/min離心20min，棄上清。 ⑤加入75%乙醇1ml，溶解沉淀，12000r/mln離心5min，棄上清(這里的上清根本看不出來(lái))。 ⑥倒置用濾紙干燥。 ⑦加入30μ溶解沉淀，一20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 如果有哪位同行提取過(guò)艾美爾球蟲(chóng)的基因組DNA，也可以給個(gè)更詳細(xì)的方案，多謝啦~！ |
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zdfang83
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8樓2016-02-24 10:44:31
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