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萌主李萌萌銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
提取艾美爾球蟲DNA的方法
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我是按照師姐提取東北虎源球蟲DNA的的方法來提取艾美爾球蟲的DNA的,可一直P不出來,各位蟲友幫忙看看這個過程里有什么細節(jié)需要補充的么?特別是我標紅的。我是第一次做,沒人指導啊~ ①將保存的卵囊液一80℃一室溫反復凍融三次后(一80℃、室溫每次各20min),加入485μ裂解液TES,15μ(20mg/ml)蛋白酶K37℃消化過夜。 ②用酚、氯仿抽提,即加入500μ酚混勻(可以用漩渦振蕩器么?)靜置10min,12000r/min離心15min。 ③取上清,再加入酚一氯仿各250μ,(這里不加異戊醇也可以么?)12000r/min離心15min,最后加入500μ氯仿,12000r離心15min,取上清。 ④沉降(沉降多長時間?),加入無水乙醇iml,一20℃沉降20min后,12000r/min離心20min,棄上清。 ⑤加入75%乙醇1ml,溶解沉淀,12000r/mln離心5min,棄上清(這里的上清根本看不出來)。 ⑥倒置用濾紙干燥。 ⑦加入30μ溶解沉淀,一20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 如果有哪位同行提取過艾美爾球蟲的基因組DNA,也可以給個更詳細的方案,多謝啦~! |

銅蟲 (初入文壇)

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