 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1633 | 回復: 4 | ||
[求助]
極糾結(jié)！求高手高手高高手��！實時熒光PCR擴增正常，為何跑膠始終彌散？
|
|
如題。已糾結(jié)2周多了，這問題。身邊能問的高手都問了，還是沒法子~~ 求點撥！ 左邊marker D2000，前沿為100bp；挨著的倆復孔熔解曲線有倆峰，已確認前者為引物峰，后者當為產(chǎn)物峰，但條帶彌散；再往右倆復孔熔解曲線單峰、峰在后，當為產(chǎn)物峰，但彌散；再往右倆復孔熔解曲線單峰、峰在前，引物二聚體；再往右倆復孔熔解曲線單峰、峰在前，但擴增曲線僅有微微抬頭、引物二聚體。 下圖為對應的熔解曲線圖。 下圖為擴增曲線圖。 http:// ![](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/jj3/image3/f6/a8/586686_1346381817_934.jpg#opennewwindow\") 條件及后續(xù)問題排查情況如下： 1、第一循環(huán)起跳，是因為前面尚做過一次20循環(huán)的降落PCR、以增加特異。 2、引物為國際糧農(nóng)組織推薦SSR引物。 3、電泳條件120v，40min，1.2%瓊脂糖凝膠，試過90v，結(jié)果一樣。上樣量2.5uL，試過6uL，結(jié)果一樣。跑膠之前，擴增產(chǎn)物UV法測過dsDNA濃度，大約200ng/uL。多次重復如此。試過降低引物濃度、可消除引物熒光、但還是彌散。 4、熒光pcr，sybr I（ROX）2倍mix，ABI；7500機器ABI；引物擴增基因250bp左右，GC含量46%50%。Tm值60、62。條件95度20秒、57度40秒、72度1分鐘（之前做過20個循環(huán)降落PCR66度-57度）。 5、問題排查，做過退火溫度梯度及質(zhì)粒陽性對照。質(zhì)粒可順利跑出1000bp條帶，mix和水沒問題。有引物二聚體條帶、降低濃度條帶消失、引物沒問題。但始終有擴增曲線、跑膠彌散。降低引物濃度后、退火溫度梯度66度到55度均試了，擴增結(jié)束要么沒有、要么引物二聚體、要么彌散、大部分泳道是彌散。 6、模板換成肝組織提取的DNA，情況也如上。 抓狂中…… 求高手高高手指點迷津！��！感激ing�。�！ 2.JPG 3.JPG [ Last edited by 愚人田蕾 on 2012-8-31 at 12:10 ] |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有209人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 著急！RT-PCR擴增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點
已經(jīng)有12人回復
- 令人糾結(jié)的PCR,求高手指點
已經(jīng)有10人回復
- 旗艦版的W7有50多個進程正常嗎，以下進程哪些是對系統(tǒng)無用，可禁用和關閉的？
已經(jīng)有13人回復
- PCR引物的量如何確定，求助高手指教
已經(jīng)有11人回復
- 請高手看看我的PCR圖片
已經(jīng)有28人回復
- 我的PCR電泳圖怎么這樣的啊。。。
已經(jīng)有11人回復
- PCR高手請進，小女子有事相求，我剛來金幣不要嫌少啊，我只有這么多啊，全給你了
已經(jīng)有20人回復
- 流感病毒RT-PCR，電泳老是跑不出條帶~~~糾結(jié)！
已經(jīng)有5人回復
- 求助高手分析DGGE圖譜，附PCR圖和DGGE圖譜
已經(jīng)有6人回復
- 向RTPCR高手求助，關于RTPCR的空白對照問題
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】PCR沒有結(jié)果，希望高手指教
已經(jīng)有29人回復
- 【求助/交流】PCR結(jié)果不理想，請教高手。
已經(jīng)有17人回復
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物設計問題（高懸賞請高手幫忙）
已經(jīng)有28人回復
jjg0912
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 17 (小學生)
- 金幣: 1882.8
- 紅花: 1
- 帖子: 367
- 在線: 113.6小時
- 蟲號: 204504
- 注冊: 2006-03-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物信息學
2樓2012-08-31 23:56:18
xyz_su3樓2012-09-04 12:15:28
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2013-10-18 23:47:20
5樓2018-04-15 17:09:12
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 愚人戇戇 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 招08考數(shù)學 +7 | laoshidan 2026-03-20 | 16/800 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0805 316求調(diào)劑 +4 | 大雪深藏 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(333分) +7 | holy J 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 余意卿 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿國科過程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿陜師大生物學071000，298分，求調(diào)劑 +3 | SYA！ 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求老師收我 +3 | zzh16938784 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 315分，誠求調(diào)劑，材料與化工085600 +3 | 13756423260 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 安憶靈 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +11 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料學碩301分求調(diào)劑 +7 | Liyouyumairs 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學控制學碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學-071000生物學-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計算機技術 +4 | solanXXX 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +16 | 于海海海海 2026-03-19 | 16/800 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 295復試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|