jerryzyy

5樓: Originally posted by jerryzyy at 2012-10-03 10:28:46
我之前有一段時間是有目的條帶出現(xiàn)的，但是上下都有拖帶，再調(diào)條件的話就又成彌散狀的帶了，我把酶什么的都換了還是不行，之前是用的鎂離子分裝的，后來又換成不分裝的了，都不行，你現(xiàn)在能P才出來嗎...

我前兩天換了個體系P出來了兩次，也和你的情況差不多，目的條帶還可以但是有非特異性條帶、引物二聚體和拖尾。我再P就P不出來了，要么是彌散狀要么是只有二聚體，很郁悶。能參考下你之前P出來的體系和條件嗎

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6樓2012-11-08 09:25:06

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jmlilan

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7樓2012-11-08 09:25:42

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6樓: Originally posted by jmlilan at 2012-11-08 09:25:06
我前兩天換了個體系P出來了兩次，也和你的情況差不多，目的條帶還可以但是有非特異性條帶、引物二聚體和拖尾。我再P就P不出來了，要么是彌散狀要么是只有二聚體，很郁悶。能參考下你之前P出來的體系和條件嗎

...

不好意思啊，我剛看到，我明天給你發(fā)我的那個體系，那個也只是有目的條帶，但是上下都有拖帶的，不知道能不能幫到你

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8樓2012-11-12 20:26:23

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8樓: Originally posted by jerryzyy at 2012-11-12 20:26:23
不好意思啊，我剛看到，我明天給你發(fā)我的那個體系，那個也只是有目的條帶，但是上下都有拖帶的，不知道能不能幫到你...

我用的是這個體系和程序，但是上下也是有拖帶的，只是目的條帶還是有的，你參考一下吧，用的是天根的酶和dNTPs，buffer：5，鎂離子：4，dNTPs：4，Primer：1*2，DNA：3，Taq0.8，水：31.2;94度：7min，（94度：1min，56度：1min，72度：1.5min）30個循環(huán)，72度：5min

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9樓2012-11-13 08:58:42

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-11-14 16:24:41

我之前用的康為的PCRmix 12.5ul mix，引物1.5ul ，DNA各1ul，1ul BSA，水7.5ul
條件：94度 5min,94 1min ，55 45s，72 1min，32循環(huán)，72 10min
P出來過兩次，有二聚體和非特異性條帶，但是目的條帶還是很不錯的（沒法上圖片，遺憾），但重復(fù)不出來了，你也可以試試

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10樓2012-11-14 09:35:36

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