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測多糖的分子量
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| 有沒有哪位朋友做過,用葡聚糖做標準品做,高效凝膠色譜測多糖的分子量的?這個葡聚糖標準品是選的多大分子量的? 價格上,是不是分子量越大的標準品越貴? 我的樣品是植物多糖。 |
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| 具體的我沒有???過,但是我們這邊有人???,所以了解一些??你???以看看這個帖??:http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=2892734 |
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多糖的分子量與分子量分布測定法 藥品名稱 多糖的分子量與分子量分布測定法 類別 原料藥 全文 多糖的分子量與分子量分布是用高效液相色譜法(中國藥典1995年版二部附錄ⅤD)測定! 1.對儀器的一般要求所用儀器為高效液相色譜儀。 色譜柱為測多糖專用凝膠柱,根據所測樣品的分子量大小選擇特定排阻范圍的凝膠柱。 檢測器為示差折光檢測器單用,有時亦可與紫外檢測器聯用! 2.系統適用性試驗按各品種項下要求對儀器進行適用性試驗,規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(n)和供試品在該分析狀態(tài)下的分配系數(Kd)應達到規(guī)定的要求! (1)n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]> <2> (2)K<[d]>=t<[R]>-t0/tT-t0 式中 W<[h/2]>為半峰寬;t<[R]>為供試品峰的保留時間,用于測柱效時,指葡萄糖峰的保留時間;t0為完全被填料顆粒網孔排阻的大分子的保留時間,一般指藍色葡聚糖的保留時間;tT為能自由進出填料顆粒網孔的小分子的保留時間,一般指葡萄糖的保留時間。 3.測定法 (1)系統校正 根據供試品分子量大小,一般選用5個已知分子量的多糖標準品(常用的為葡聚糖dextran),分別用流動相溶解制成每1ml中約含10mg的溶液,分別注入25μl標準品溶液,記錄示差色譜圖。 由GPC專用軟件繪制標準曲線! 【性回歸方程為:logM<[w]>=a+bRT式中 M<[w]>為標樣的已知重均分子量;RT為標樣的保留時間! (2)樣品測量 注入25μl供試品溶液,記錄示差色譜圖,分子量計算如下: Mn=ΣRI<>/Σ(RI<>/M<>Mw=Σ(RI<>M<> /ΣRI<>D=Mw/Mn 式中 Mn為數均分子量;RIi為樣品i級分的物質量,即示差色譜圖的峰高;Mi為樣品i級分的分子量,即示差色譜圖I時間點代入標準曲線獲得的分子量! 4.結果處理采用GPC專用軟件,可獲得樣品歸一化色譜圖,微分、積分分子量分布圖,各時間點的分子量(片斷數據)和各種平均分子量! 「鶕┰嚻沸枰x擇各項測定結果。 |
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