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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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yyout002

金蟲 (小有名氣)

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求脲酶活性測(cè)定方法

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1樓 2012-09-12 16:18:26

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楊攀1991

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【答案】應(yīng)助回帖

實(shí)驗(yàn)試劑
①甲苯
②10%尿素
③檸檬酸鹽緩沖液：分別稱取368g檸檬酸溶于600ml水；295g氫氧化鉀溶于1000ml蒸餾水，將兩溶液合并，用1M氫氧化鈉將pH調(diào)至6.7，用蒸餾水稀釋至2000ml。
④苯酚鈉溶液：A、將62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀釋至100ml；B、27g氫氧化鈉溶于100ml水，將兩溶液保存在冰箱里。使用前將溶液A與溶液B各20ml混合，用蒸餾水稀釋至100ml。
⑤次氯酸鈉溶液：用蒸餾水稀釋試劑，至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定。
⑥標(biāo)準(zhǔn)溶液：一、稱取0.4717g硫酸銨溶于水，稀釋至1000ml（1ml含100ug氮），可將此溶液稀釋10倍供用；
標(biāo)曲繪制：往50ml容量瓶中分別注入1ml、3ml、5ml、7ml、9ml、11ml及13ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，加蒸餾水至20ml，再加4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻，20分鐘后顯色，定容至50ml，1小時(shí)內(nèi)在分光光度計(jì)上于578nm處比色，根據(jù)光密度值與溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作步驟
①稱取5g過(guò)1mm篩的風(fēng)干土樣，置于100ml三角瓶中，加1ml甲苯。
②甲苯處理15分鐘后，往瓶中注入10ml 10%尿素溶液和20ml 檸檬酸鹽緩沖液（PH6.7），仔細(xì)混合。
③將瓶在37℃恒溫箱中放置24h后，過(guò)濾后取3ml濾液注入50ml容量瓶平中。用蒸餾水稀釋至10ml，然后加入4ml苯酚鈉溶液，并立即加入3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。加入每一試劑后，立即將混合物仔細(xì)混合。
④與此同時(shí)，對(duì)每一土樣設(shè)置用水代替基質(zhì)的對(duì)照，對(duì)整個(gè)試驗(yàn)，設(shè)置無(wú)土壤的對(duì)照，一檢驗(yàn)試劑的純度。
⑤20分鐘后顯色，定容至50ml，1小時(shí)內(nèi)在分光光度計(jì)上于578nm處比色用1㎝的比色槽，在比色計(jì)上于波長(zhǎng)578nm處測(cè)定顏色的深度（靛酚的青色能在60分鐘內(nèi)保持穩(wěn)定）。用供試樣品所得的消光值減去對(duì)照樣品消光值的差，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出氨態(tài)氮量。
⑧土壤的脲酶活性，以每一克土的氨氮的毫克數(shù)表示，其計(jì)算式如下：
氨氮（mg）=A*2； A：從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的的氨氮毫克數(shù)； 2：換算成1克土的系數(shù)
我也在開始這個(gè)東西，以上方法是中科院一個(gè)同學(xué)給我的，共享下~

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2樓2014-03-28 09:45:25

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