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yyout002金蟲 (小有名氣)
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脲酶活性測定 已有1人參與
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![]() ![]() ![]() 求脲酶活性測定方法![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() |
新蟲 (初入文壇)
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實(shí)驗(yàn)試劑 ①甲苯 ②10%尿素 ③檸檬酸鹽緩沖液:分別稱取368g檸檬酸溶于600ml水;295g氫氧化鉀溶于1000ml蒸餾水,將兩溶液合并,用1M氫氧化鈉將pH調(diào)至6.7,用蒸餾水稀釋至2000ml。 ④苯酚鈉溶液:A、將62.5g苯酚溶于少量乙醇,加2ml甲醇和18.5ml丙酮,用乙醇稀釋至100ml;B、27g氫氧化鈉溶于100ml水,將兩溶液保存在冰箱里。使用前將溶液A與溶液B各20ml混合,用蒸餾水稀釋至100ml。 ⑤次氯酸鈉溶液:用蒸餾水稀釋試劑,至活性氯的濃度為0.9%,溶液穩(wěn)定。 ⑥標(biāo)準(zhǔn)溶液:一、稱取0.4717g硫酸銨溶于水,稀釋至1000ml(1ml含100ug氮),可將此溶液稀釋10倍供用; 標(biāo)曲繪制:往50ml容量瓶中分別注入1ml、3ml、5ml、7ml、9ml、11ml及13ml標(biāo)準(zhǔn)溶液,加蒸餾水至20ml,再加4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液,隨加隨搖勻,20分鐘后顯色,定容至50ml,1小時(shí)內(nèi)在分光光度計(jì)上于578nm處比色,根據(jù)光密度值與溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 操作步驟 ①稱取5g過1mm篩的風(fēng)干土樣,置于100ml三角瓶中,加1ml甲苯。 ②甲苯處理15分鐘后,往瓶中注入10ml 10%尿素溶液和20ml 檸檬酸鹽緩沖液(PH6.7),仔細(xì)混合。 ③將瓶在37℃恒溫箱中放置24h后,過濾后取3ml濾液注入50ml容量瓶平中。用蒸餾水稀釋至10ml,然后加入4ml苯酚鈉溶液,并立即加入3ml次氯酸鈉溶液,隨加隨搖勻。加入每一試劑后,立即將混合物仔細(xì)混合。 ④與此同時(shí),對每一土樣設(shè)置用水代替基質(zhì)的對照,對整個(gè)試驗(yàn),設(shè)置無土壤的對照,一檢驗(yàn)試劑的純度。 ⑤20分鐘后顯色,定容至50ml,1小時(shí)內(nèi)在分光光度計(jì)上于578nm處比色用1㎝的比色槽,在比色計(jì)上于波長578nm處測定顏色的深度(靛酚的青色能在60分鐘內(nèi)保持穩(wěn)定)。用供試樣品所得的消光值減去對照樣品消光值的差,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出氨態(tài)氮量。 ⑧土壤的脲酶活性,以每一克土的氨氮的毫克數(shù)表示,其計(jì)算式如下: 氨氮(mg)=A*2; A:從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的的氨氮毫克數(shù); 2:換算成1克土的系數(shù) 我也在開始這個(gè)東西,以上方法是中科院一個(gè)同學(xué)給我的,共享下~ |
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