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[求助]
菌種保藏問題
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我要保藏的是牛奶中的嗜冷菌 那么我能用脫脂乳來代替甘油嗎? 是否直接挑一環(huán)單菌落加入培養(yǎng)液和脫脂奶混合的凍干管中-80度凍干就可以了? 嗜冷菌保藏用的保護劑跟一般的乳酸菌能一樣嗎? 求助完整詳細的嗜冷菌凍干方法。謝謝謝謝 [ Last edited by yonny1018 on 2012-9-12 at 17:34 ] |
銅蟲 (初入文壇)
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來個詳細的,此法也適用于嗜冷菌。 1. 冷凍干燥管的制備 安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后121℃下加壓滅菌20分鐘,備用。 2. 保護劑的準備 12%的脫脂乳,121℃下加壓滅菌15分鐘,4℃冰箱冷藏備用。 3. 凍干樣品的準備 在最適宜的培養(yǎng)條件下將待保藏的微生物培養(yǎng)至靜止期或成熟期,若是液體培養(yǎng)需離心除去培養(yǎng)基;若是固體培養(yǎng),以接種環(huán)刮取菌體(或用棉簽刮。┡c保護劑混合均勻,分裝。培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜。用較長的毛細滴管,滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1毫升。分裝安瓿管,時間盡量要短,分裝后立即預(yù)凍。 4. 預(yù)凍 先放4℃冰箱,半小時后放-20℃冰箱。一般預(yù)凍2小時以上。 5. 冷凍干燥 將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi),開始冷凍干燥,時間一般為8-20小時。終止干燥時間應(yīng)根據(jù)下列情況判斷: —— 安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀; —— 真空度接近空載時的最高值; —— 樣品溫度與管外溫度接近; —— 選用1-2支對照管,內(nèi)裝蒸餾水,其水份裝量與菌懸液同量,當(dāng)水分完全升華后,可視為干燥完結(jié); —— 選用一個安瓿管,裝1-2%氯化鈷,如變深蘭色,可視為干燥完結(jié)。 冷凍干燥完畢后,取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi),備用。 6. 真空封口及真空檢驗 真空顯示0.021mPa以下,在真空條件下將安瓿管腰部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度. 7. 保藏 安瓿管4℃冷柜避光保存。 8. 冷凍干燥法適用范圍 大多數(shù)細菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母菌等的保藏,不適用于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。 9. 保藏周期 不同微生物的保藏周期不同,一般在10年左右。 10. 復(fù)蘇方法 —— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部, —— 將安瓿管頂部燒熱, —— 用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現(xiàn)裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端, —— 用培養(yǎng)液溶解菌塊,使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上,進行適溫培養(yǎng)。 |
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