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[求助]
菌種保藏問題
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我要保藏的是牛奶中的嗜冷菌 那么我能用脫脂乳來代替甘油嗎？ 是否直接挑一環(huán)單菌落加入培養(yǎng)液和脫脂奶混合的凍干管中-80度凍干就可以了？ 嗜冷菌保藏用的保護(hù)劑跟一般的乳酸菌能一樣嗎？ 求助完整詳細(xì)的嗜冷菌凍干方法。謝謝謝謝 [ Last edited by yonny1018 on 2012-9-12 at 17:34 ] |
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3樓2012-09-14 12:09:47
lanhai6589
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yonny1018: 金幣+5 2012-09-14 12:08:25
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yonny1018: 金幣+5 2012-09-14 12:08:25
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來個(gè)詳細(xì)的，此法也適用于嗜冷菌。 1. 冷凍干燥管的制備 安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí)，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后121℃下加壓滅菌20分鐘，備用。 2. 保護(hù)劑的準(zhǔn)備 12%的脫脂乳，121℃下加壓滅菌15分鐘，4℃冰箱冷藏備用。 3. 凍干樣品的準(zhǔn)備 在最適宜的培養(yǎng)條件下將待保藏的微生物培養(yǎng)至靜止期或成熟期，若是液體培養(yǎng)需離心除去培養(yǎng)基；若是固體培養(yǎng)，以接種環(huán)刮取菌體（或用棉簽刮取）與保護(hù)劑混合均勻，分裝。培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個(gè)/ml為宜。用較長的毛細(xì)滴管，滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1毫升。分裝安瓿管，時(shí)間盡量要短，分裝后立即預(yù)凍。 4. 預(yù)凍 先放4℃冰箱，半小時(shí)后放-20℃冰箱。一般預(yù)凍2小時(shí)以上。 5. 冷凍干燥 將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥，時(shí)間一般為8-20小時(shí)。終止干燥時(shí)間應(yīng)根據(jù)下列情況判斷： —— 安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀； —— 真空度接近空載時(shí)的最高值； —— 樣品溫度與管外溫度接近； —— 選用1-2支對(duì)照管，內(nèi)裝蒸餾水，其水份裝量與菌懸液同量，當(dāng)水分完全升華后，可視為干燥完結(jié)； —— 選用一個(gè)安瓿管，裝1-2%氯化鈷，如變深蘭色，可視為干燥完結(jié)。 冷凍干燥完畢后，取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi)，備用。 6. 真空封口及真空檢驗(yàn) 真空顯示0.021mPa以下，在真空條件下將安瓿管腰部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測(cè)定儀測(cè)定真空度. 7. 保藏 安瓿管4℃冷柜避光保存。 8. 冷凍干燥法適用范圍 大多數(shù)細(xì)菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母菌等的保藏，不適用于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。 9. 保藏周期 不同微生物的保藏周期不同，一般在10年左右。 10. 復(fù)蘇方法 —— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部， —— 將安瓿管頂部燒熱， —— 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端， —— 用培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上，進(jìn)行適溫培養(yǎng)。 |
2樓2012-09-13 09:52:50
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